DKK1在胶质瘤中的表达分析及其与肿瘤恶性程度相关性的研究

摘要

目的： 分别从蛋白和基因水平，检测DKK1在胶质瘤细胞株/系、肿瘤患者组织、血清和脑脊液中的表达情况；分析DKK1表达程度与胶质瘤级别的相关性。 方法： 细胞株/系：选用12株胶质母细胞瘤细胞株/系(U251、SF767、SF295、T98G、MGR1、MGR2、MGR3、SKMG1、SKMG4、UWR7、UW28、SKI-N2)、髓母细胞瘤细胞株D341和星形细胞瘤2级细胞系SHG44共14株胶质瘤细胞株/系，人脑星形胶质细胞作为正常对照组。ELISA双抗体夹心法检测上述各细胞培养上清液和细胞裂解液中DKK1蛋白含量；半定量RT-PCR检测上述各细胞中DKK1mRNA表达情况，t检验分析胶质瘤细胞组和正常对照组之间DKK1表达差异； 肿瘤组织：收集胶质瘤患者肿瘤组织，以脑外伤内减压切除组织为对照组，制成石蜡包埋组织和新鲜冰冻组织。采用免疫组织化学方法检测石蜡包埋组织中DKK1蛋白含量，CMH卡方检验比较DKK1在胶质瘤组与正常对照组之间的表达差异，Kendall'tau-c相关性分析法检验DKK1表达与胶质瘤级别的相关性；半定量RT-PCR检测上述组织标本中DKK1mRNA表达情况，t检验分析胶质瘤组和正常对照组之间DKK1表达差异； 脑脊液和血清：收集胶质瘤患者，神经系统良性肿瘤患者(垂体瘤，脑膜瘤，神经鞘瘤，听神经瘤等)的脑脊液和血清，以脑外伤患者的脑脊液和血清为对照组。ELISA双抗体夹心法检测各组脑脊液和血清中DKK1蛋白表达情况，t检验分析各组间DKK1表达差异。 结果： 1.ELISA检测细胞培养上清液和细胞裂解液结果： ①12株高级别胶质瘤细胞株/系均有不同程度DKK1蛋白表达，低级别胶质瘤细胞系SHG44、髓母细胞瘤细胞株D341均未见表达；对照组人脑星形胶质细胞和各细胞培养液中亦未见DKK1蛋白表达。高级别胶质瘤细胞组中与低级别胶质瘤细胞、正常对照组之间DKK1蛋白表达差异有统计学意义(P＜0.05)，低级别胶质瘤细胞与正常对照组均无DKK1蛋白表达，差异无统计学意义(P＞0.05)； ②高级别胶质瘤细胞株/系组中，培养上清液中DKK1蛋白含量明显高于细胞裂解液中DKK1蛋白含量，差异有统计学意义(P＜0.05)。 2.ELISA检测脑脊液和血清中DKK1蛋白表达结果： ①脑脊液中，胶质瘤组DKK1含量显著高于神经系统良性肿瘤组及正常对照组；神经系统良性肿瘤组与正常对照组间无明显差异； ②血清中，胶质瘤组，神经系统良性肿瘤组及正常对照组之间DKK1含量均未见显著性差异。 3.免疫组织化学检测石蜡包埋肿瘤组织中DKK1蛋白表达结果①DKK1在胶质瘤组织中的阳性表达率为(91.5％，43/47)，在正常脑组织中阳性表达率为(18.1％，2/11)；胶质瘤组织中DKK1阳性表达水平高于正常脑组织； ②DKK1在胶质瘤组织中的表达与肿瘤病理分级呈正相关。 4.RT-PCR检测DKK1mRNA表达结果： ①12株胶质母细胞瘤细胞株/系的DKK1基因扩增产物均有一条230bp左右亮度不一的特异性条带；低级别胶质瘤细胞系SHG44、髓母细胞瘤细胞株D341和正常对照组人脑星形胶质细胞均未见特异性条带； ②胶质瘤组织中灰度值高于正常组织，差异有统计学意义(p＜0.05)。 结论： 1.DKK1在胶质瘤中的表达显著高于在正常人脑中的表达： 2.在胶质瘤中，随着肿瘤级别的增高DKK1的表达程度亦增高； 3.胶质瘤脑脊液中DKK1含量显著高于神经系统良性肿瘤组及正常对照组，可作为胶质瘤鉴别诊断的指标。

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参考文献

综述 Dickkopf基因家族的结构和功能及其与癌症的关系

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