CD147参与白藜芦醇诱导的人恶性黑色素瘤细胞G361凋亡及机制研究

摘要

目的:
　　 探讨白藜芦醇对人恶性黑色素瘤细胞株G361的生物学效应及CD147在其中的作用机制。
　　 方法:
　　 1．用不同浓度的白藜芦醇(Rev)处理人恶性黑色素瘤细胞株G361，时间为48h，MTT的方法检测不同浓度白藜芦醇对G361细胞增殖的影响。
　　 2．用Westernblot的方法检测白藜芦醇对G361细胞株中XIAP，Caspase-9和Caspase-3表达的影响。
　　 3．用RT-PCR、Westernblot的方法检测白藜芦醇对G361细胞株中CD147表达的影响。
　　 4．用瞬时转染的方法将CD147全长cDNA转入G361细胞，以转染空载体作为对照，随后加或不加白藜芦醇，分别标记为：空载组，CD147转染组，CD147转染组+Rev,用Westernblot的方法检测各组细胞中CD147，XIAP，Caspase-9和Caspase-3蛋白水平的变化。
　　 5．用流式细胞仪检测空载组，CD147转染组，CD147转染组+Rev细胞的凋亡。
　　 6．电子显微镜观察空载组，CD147转染组，CD147转染组+Rev细胞的形态学变化。
　　 结果:
　　 1.MTT结果显示：白藜芦醇能抑制人恶性黑色素瘤细胞株G361细胞的增殖能力，且随浓度的增加，抑制能力也相应增强，IC50=21.06+-0.383μM，根据IC50的值，确定后面实验的药物作用浓度为OμM，2μM，4μM，8μM，l6μM。
　　 2．不同浓度的白藜芦醇作用G361细胞48h后，其X连锁凋亡抑制蛋白XIAP的表达水平下调，而Caspase-9和Caspase-3的表达上调，说明白藜芦醇能促进G361细胞的凋亡。
　　 3．用不同浓度白藜芦醇处理G361细胞48h，加药组细胞中的CD147mRNA水平低于未加药组，当浓度为2μM，4μM，8μM，16μM时，比率分别为62.82％，56.27％，50.27％，43.25％(P<0.05)。但加药组不同浓度间CD147mRNA水平无显著差异(P>0.05)。CD147蛋白水平随白藜芦醇浓度的增加降低，呈浓度依赖。根据已得的实验结果，选择浓度为16μM的白藜芦醇分别处理G361细胞Oh，12h，24h，48h，96h，不同作用时间G361细胞中的CD147mRNA和蛋白水平并无明显改变(P>0.05)。
　　 4．与空载组比较，CD147转染组细胞中的CD147和XIAP的蛋白表达水平上调，而caspase-3和caspase-9的蛋白表达水平降低，用白藜芦醇处理CD147转染组，下调CD147的表达水平，XIAP的蛋白表达水平也随之降低，而caspase-3和caspase-9的蛋白表达水平增高，证明白藜芦醇能通过下调CD147的表达影响XIAP，Caspase-9和Caspase-3的表达。
　　 5.CD147转染组用白藜芦醇干预后，G361细胞的凋亡率为2.38％，显著高于空载组和CD147转染组（P<0.05），空载组的凋亡率为0.76％，而CD147转染组的凋亡率为0.30％，低于空载组，说明CD147对G361细胞的凋亡有保护作用，而白藜芦醇能通过下调CD147的表达诱导G361细胞的凋亡。
　　 6．CD147转染组+Rev细胞体积变小，胞质浓缩，出现许多空泡化结构，星月状小体等一系列凋亡细胞的特征。
　　 结论:
　　 1．白藜芦醇能抑制人恶性黑色素瘤细胞株G361细胞的增殖，促进其凋亡。
　　 2．白藜芦醇能抑制G361细胞中CD147mRNA水平的表达，并以浓度依赖的方式抑制G361细胞中CD147蛋白水半的表达，与作用时间无关。
　　 3.CD147对人恶性黑色素瘤细胞株G361的凋亡具有保护效应，白藜芦醇能通过下调CD147进而影响XIAP，Caspase-9和Caspase-3的表达诱导细胞凋亡。