不同幽门螺杆菌临床菌株对人胃黏膜细胞系GES-1基因表达谱影响的研究

摘要

我国胃癌的发生率在各类恶性肿瘤中位居第二,是严重危害人民身体健康的疾病。20世纪80年代以来,在人群中具有较高感染率的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)与胃癌的关系已受到广泛关注。流行病学证实,H.pylori慢性感染是导致胃癌的重要危险因素,与胃癌的发生发展密切相关,感染人群患胃癌的危险比非感染者高4倍。大多数研究表明在“性胃炎-胃粘膜萎缩-肠化生-异型增生一胃癌”这一癌变模式中,H.pylori可能起着先导作用。1998年Watanabe等首次报道H.pylori感染的蒙古沙土鼠可发生胃癌,这是H.pylori感染可诱发胃癌的直接证据。1994年,世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)正式将H.pylori列为胃癌的Ⅰ类致癌原。但H.pylori引起胃癌的机制尚未完全阐明。
　　 胃癌的发生是一个多病因、多阶段的过程,感染H.pylori后,其结局可能发生慢性胃炎,也可能发展为胃癌。提示不同的菌株可能对胃黏膜上皮细胞产生不同的影响,导致不同程度的疾病发生。
　　 本实验选用临床分离自胃癌、胃炎患者的菌株各10例分别和GES-1细胞以不同浓度比例共培养,12h、24h和48h后分别收获细胞,进行MTT和流式细胞仪检测。结果显示分离自胃癌患者胃黏膜的H.pylori菌株较分离自胃炎患者胃黏膜的菌株对GES-1细胞在增殖方面的影响更具显著性,低浓度菌液可不同程度地促进细胞增殖,高浓度菌液则抑制细胞增殖活性,并且随着时间延长,低浓度菌液促细胞增殖活性逐渐升高,高浓度菌液对细胞增殖的抑制作用也越发明显。不同疾病来源的H.pylori菌株均会引起胃黏膜上皮细胞凋亡率增加,但组间差异无显著性。随着时间的延长和细菌浓度的提高,H.pylori菌株促胃黏膜上皮细胞凋亡的影响越发显著。
　　 分别挑选出对GES-1细胞的增殖影响最显著和对细胞增殖影响最小的两株H.pylori菌株,分别和IGES-1细胞共培养,收获细胞后提取RNA产物与全基因组表达谱芯片杂交后进行统计分析。结果显示H.pylori感染GES-1细胞后引起胃黏膜上皮细胞基因表达谱广泛地改变,这些差异表达基因与细胞周期、细胞骨架和运动、细胞凋亡、信号转导、物质和能量代谢等过程有关。筛选出一些与肿瘤的发生发展密切相关的基因,如ETS1、JUN、JUNB、CLDN1、CXCL2、IRAK2、NUPR1、STC2、TP53BP1、TNFAIP3、TRAF1、DIO2、ST13以及SR蛋白家族,发现差异表达基因参与了多条信号通路的组成,为下一步的基因表达验证和生物学功能研究提供了新的线索。