低氧训练对大鼠肾组织细胞凋亡相关因子的影响

摘要

目的：通过采用不同持续时间低氧后训练的大鼠低氧训练模型，研究低氧、训练以及低氧训练对大鼠肾组织细胞凋亡相关因子的影响。 方法：60只SD大鼠按体重随机分为6组，每组10只，即：对照组(A)、低氧8h组(B)、低氧12h组(C)、常氧训练组(D)、低氧8h训练组(E)和低氧12h训练组(F)。D、E、F组大鼠每天在坡度为0的动物跑台上以25m/min的速度训练1h。训练完后，将B、E组和C、F组依次放入氧浓度为12.5％(相当于海拔4000m)的低氧舱内8h和12h。实验期为4wk，5d/wk。最后一次实验结束后24小时，大鼠均实施速眠新II腹腔麻醉，其理想后断尾取全血(检测RBC、HB、HCT值)后断头处死，取肾髓质外皮质部组织制备肾组织石蜡切片，HE染色检测肾组织细胞的形态学变化；免疫组化法检测大鼠肾组织细胞HIF-1a、B细胞淋巴瘤／白血病癌基因-2(B cell lymphoma/leukemia 2，Bcl-2)、Bax(Bcl-2 associated x，Bax)因子、EPO的蛋白表达以及TUNEL标记法在光镜下观察肾组织凋亡细胞核数目。 结果： 1．RBC、HB、HCT三个指标的结果显示：B组与E组比较均具有显著性差异(P<0.05)；A组和D组比较亦均具有显著性差异(P<0.05)。 2．肾组织切片进行HE染色显示：A组和B组大鼠肾组织细胞结构完整，肾小管上皮细胞未见特殊改变；C组肾小管轻度肿胀，部分刷状缘脱落，管腔内偶可见脱落的细胞；D肾小管扩张，细胞扁平，轻度浊肿，刷状缘脱落，肾小球轻度淤血；E组较D组病变明显减轻，肾小管变性范围和程度均明显小于和轻于D组，胞核基本正常，肾小管轻度肿胀；F组肾小管上皮细胞水肿样变性，以近曲小管为重，表现为肾小管管腔扩张，管内可见管形和脱落细胞；上皮细胞核染色质边集，胞浆空泡样变性。 3．TUNEL染色切片统计学分析结果显示：E组和F组、C组与F组比较，具有显著性差异(P<0.05)；A组与D组比较，具有显著性差异(P<0.05)。 4．免疫组化染色切片观察大鼠肾组织HIF-1a的蛋白表达显示：将实验各组肾组织样本的石蜡切片进行免疫组化染色，在显微镜下观察发现：HIF-1a免疫组织化学阳性物质定位于细胞核内，呈弥散或颗粒状或二者混合。呈强染性的肾组织细胞核中可见丰富阳性反应颗粒，细胞核周围的胞浆内亦有阳性表达。统计学分析结果显示： B组、C组分别与A组比较，均具有显著性差异(P<0.05)；E组和F组比较具有显著性差异(P<0.05)；A组和D组比较，具有显著性差异(P<0.05)。 5．免疫组化染色切片观察大鼠肾组织Bcl-2、Bax和EPO的表达显示，Bcl-2、Bax和EPO免疫组织化学阳性物质定位于胞浆内，偶见胞膜(或)核膜，细胞核被苏木素复染成蓝色。统计结果显示：A组、B组、C组之间Bcl-2、Bax的表达均具有显著性差异(P<0.05)；E组与F组、C组与F组比较之间比较，具有显著性差异(P<0.05)；A组和D组比较具有显著性差异(P<0.05)。EPO的表达结果显示：EPO结果显示：B组和C组分别与A组比较，B组与A组有显著性差异(P<0.05)。 6．大鼠肾组织细胞凋亡与Bax、Bax/Bcl-2比值的相关性以及HIF-1a与Bax表达的相关性显示：大鼠肾组织细胞凋亡与Bax、Bax/Bcl-2比值之间存在正相关(P<0.05)；肾组织细胞HIF-1a的蛋白表达与Bax之间存在正相关(P<0.05)。 结论： 1．合适的低氧刺激使SD大鼠有氧代谢能力提高。 2．低氧训练可诱导大鼠肾组织HIF-1a、EPO、Bcl-2以及Bax蛋白表达；细胞凋亡率与凋亡指数及病理损伤与运动时低氧刺激有关，以低氧12小时训练组最明显。 3．Bcl-2与Bax参与调控肾组织细胞的凋亡；HIF-1a的表达可能协同Bcl-2家族凋亡相关因子的表达，在低氧训练导致的肾组织细胞凋亡中发挥双重效应。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词表

声明

1.前言

2.材料与方法

2.1材料

2.2方法

2.3质量控制

2.4统计学分析

3.结果

3.1大鼠低氧训练过程的一般状况

3.2大鼠RBC、Hb及HCT的含量

3.3大鼠肾组织细胞凋亡及形态学检测结果

3.4 HIF-1α与凋亡相关因子Bax、Bcl-2、EPO的蛋白表达

3.5大鼠肾组织细胞凋亡、HIF-1 α及Bcl-2、Bax、EPO相关分析结果

4.讨论

4.1低氧训练对大鼠RBC、Hb、HCT的影响

4.2低氧训练对大鼠肾组织形态结构的影响

4.3低氧训练对大鼠肾组织细胞EPO的影响

4.4低氧训练对大鼠肾组织细胞HIF-1a的影响

4.5低氧训练对大鼠肾组织细胞凋亡相关因子的影响

4.6肾组组细胞凋亡与HIF-1α及凋亡相关因子的相关性

5.结论

参考文献

综述低氧运动对肾细胞调亡的影响进展

在读期间发表的主要论文、承担课题

致谢