神经生长因子受体p75和Trka在糖尿病大鼠膀胱和腰骶背根神经节的表达

摘要

目的：通过动物实验研究正常及糖尿病大鼠膀胱组织及背根神经节 (dorsal root ganglia，DRG) 中神经生长因子(Nerve growth factor，NGF)受体p75和trka的表达情况，分析糖尿病膀胱病变(diabetic cystopathy，DC)与膀胱组织及DRG中P75和trka受体表达的相关性，说明P75和trka在DC发生发展中的作用，进一步探讨DC的发病机制，为应用NGF治疗DC奠定理论基础。 方法：所用动物为Sprague-Dawley(SD)成年雌性大鼠，由河北医科大学实验动物中心提供。成年雌性SD大鼠35只，体重200-250g，随机分成2组，对照组15只，糖尿病模型组20只。应用STZ单次腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型，注射剂量为60mg/kg，对照组腹腔注射等体积的枸椽酸缓冲液。两组均给予普通饲料饲喂，鼠饲料购自河北医科大学实验动物中心，自由进食进水。注射STZ 72小时后测尾静脉血葡萄糖浓度(blood glucose,BG)。BG>16.7mmol/L为模型成功。于造模成功8周后检测两组动物尾静脉血葡萄糖浓度，低于16.7mmol/L的大鼠仍被排除。 两组均于造模成功后8周进行实验，实验前1天测定代谢笼24小时尿量。5％水合氯醛麻醉，分别用生理盐水和含0.1％DEPC的4％多聚甲醛的0.1mol/L膦酸缓冲液(pH7.4)进行全身灌注，切取完整膀胱和两侧腰6骶1DRG，称量膀胱湿重，所有标本立即固定。苏木素—伊红(HE)染色，光镜下观察糖尿病大鼠膀胱逼尿肌与DRG的形态学变化，结合两组大鼠的血糖、体重、膀胱湿重、24小时尿量的变化确认实验组糖尿病膀胱病变的形成。应用免疫组化方法检测膀胱组织和DRG神经元内p75和trka的表达情况。镜下观察结果，膀胱逼尿肌细胞内或DRG$O经元内含有棕黄色颗粒为阳性。每张切片在高倍镜(×400)下选择8—10个视野并记数100个细胞，判断标准：阳性细胞数<10％为阴性表达(－)，=10％、<30％为弱阳性(+)，=30％、<60％为中度阳性表达(++)，=60％为强阳性表达(+++)。统计学处理：结果以均数采用±标准差表示，应用SPSS13.0系统软件进行t检验(方差不齐时做 t'检验)及等级资料秩和检验，P<0.05认为差异有显著性。 结果 1 血糖、体重、代谢笼24小时尿量及膀胱湿重的变化大鼠腹腔注射STZ 72小时后，血糖已经升高。8周时，糖尿病组(n=20)的血糖明显高于对照组(n=15)，糖尿病组血糖与对照组比较 (30.900±3.2942 vs 4.787±0.2973)(mmol/L)，差异有显著性(P=0.000)。 糖尿病组(n=20)体重明显下降，糖尿病组体重与对照组(n=15)比较(248.05±15.517 vs 322.80±15.920)(g)，差异有显著性(P=0.000)。 8 周时代谢笼24小时尿量增加，糖尿病组(n=20)尿量与对照组(n=15)H5较(88.310±7.2223 vs 20.927±2.9004)(ml)，差异有显著性(P=0.000)。 糖尿病组(n=20)膀胱湿重增加，糖尿病组膀胱湿重与对照组(n=1.5)比较(171.15±6.081 vs 135.53±5.330)(mg)，差异有显著性(P=0.000)。 2 HE染色与免疫组化检测光镜下观察两组大鼠逼尿肌结构表现，对照组：可见移形上皮细胞排列整齐，固有膜完整。粘膜下及肌间神经丛多见。逼尿肌细胞大小形态均一，肌纤维排列有序，肌束之间结构紧密，间隙被结缔组织所充满。糖尿病组：粘膜下层有明显的嗜酸细胞浸润，固有膜充血水肿，逼尿肌肌细胞肥大，形态多样，肌束排列紊乱松散，肌束横断面饱满，体积增加。肌束之间间隙明显增宽，胶原及纤维组织增生，肌束间小血管充血，神经束可见。根据以上结果可以确认，糖尿病膀胱病变已经形成。 免疫组化结果为：p75在膀胱壁黏膜下、固有膜和逼尿肌细胞内均有分布，和正常组相比，糖尿病组表达明显减少；p75在DRG主要分布在细胞浆内，和正常组相比，糖尿病组表达明显减少。trka在膀胱壁主要分布于逼尿肌细胞胞浆内，在移行上皮和固有膜也有少量表达，和正常组相比，糖尿病组表达明显减少；trka在DRG主要分布在细胞浆内，和正常组相比，糖尿病组表达明显减少。 结论：本试验表明，NGF的两种受体p75及trka，无论是在STZ诱导的糖尿病大鼠膀胱组织还是在脊髓背根神经节中均表达减少， p75及trka．的变化在糖尿病膀胱病变的形成中扮演了重要的角色。

目录

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 糖尿病膀胱病变发生机理研究进展

致谢

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