硫氧还蛋白-1在实验性急性坏死性胰腺炎大鼠的表达及褪黑素干预的影响

摘要

目的：⑴观察硫氧还蛋白-1及Trx-1mRNA在实验性急性坏死性胰腺炎大鼠血清和(或)胰腺组织的表达。⑵观察褪黑素前后干预对实验性ANP大鼠的血清和胰腺组织表达Trx-1及或Trx-1mRNA的影响；探讨褪黑素前后干预对ANP大鼠胰腺组织的保护作用与机制。 方法：⑴48只雄性SD大鼠随机分成ANP模型组(A组)和对照组(C组)，每组各24只。A组大鼠腹腔注射6％左旋精氨酸(L-Arginine，L-Arg)25ml/kg体重，每次间隔1小时，共3次，诱发ANP，且在诱发ANP前、后半小时腹腔注射生理盐水(20ml/kg体重)各一次：C组大鼠腹腔注射相当于A组各次注射用量的等容积生理盐水。每组术后6 h、12 h及24h分批处置大鼠，每组每时点分别处死8只。抽血测定血清淀粉酶、Trx-1的含量；取胰腺组织做病理学检查，免疫组织化学测定胰腺组织Trx-1的表达，RT-PCR测定胰腺组织Trx-1 mRNA的表达。⑵96只雄性SD大鼠随机分成ANP模型组(A组)、褪黑素前干预组(M1组)、褪黑素后干预组(M2组)、对照组(C组)。A组大鼠腹腔注射6％L-Arg(25ml/kg体重)，每次间隔1小时，共3次，诱发ANP，且在诱发ANP前、后半小时腹腔注射生理盐水(20ml/kg体重)各一次；M1组和M2组大鼠诱发ANP的方法同A组，但与A组不同之处是，M1组大鼠在诱发ANP前半小时腹腔注射0.25％褪黑素(20ml/kg体重)一次替代生理盐水，而M2组大鼠在诱发ANP后半小时腹腔注射0.25％褪黑素(剂量同前)一次替代生理盐水；C组大鼠腹腔注射相当于A组各次注射用量的等容积生理盐水。每组术后6 h、12 h及24h分批处置大鼠，每组每时点分别处死8只。抽血测定血清淀粉酶、Trx-1、白细胞介素-6、谷胱甘肽、总超氧化物歧化酶、丙二醛的含量；取胰腺组织做病理学检查，胰腺组织匀浆测定MDA、髓过氧化酶的含量，免疫组织化学测定胰腺组织Trx-1的表达，RT-PCR测定胰腺组织Trx-1 mRNA的表达。 结果：⑴A组病理学及血清淀粉酶变化符合ANP的变化。与C组同时点值比较，A组大鼠血清表达的Trx-1的含量在6h、12h时点值显著降低，24h时点值显著升高，呈现随时间延长先降低后升高的趋势，在24h时点达峰值。A组大鼠胰腺组织表达的Trx-1和Trx-1 mRNA的水平显著高于C组，在12h时点达峰值。⑵结果胰腺组织的肉眼观、显微镜下的病理学变化及评分证实左旋精氨酸导致A组的ANP，而且24h时点最为严重。与A组比较，M1组和M2组的病理学变化显著减轻，M1组减轻更为明显。A组大鼠血清淀粉酶显著高于C组，M1组12h时点值和M2组24h时点值则显著低于A组。与C组比较，M1组和M2组大鼠血清Trx-1的含量在12h时点值显著升高，在6、24h时点无显著差异；与A组比较，M1组和M2组血清Trx-1的含量在6、12h时点值显著升高，24h时点显著降低，量的峰值前移。M1组和M2组大鼠胰腺组织表达的Trx-1和Trx-1 mRNA的水平显著高于C组；与A组比较，M1组和M2组在6h时点Trx-1和Trx-1 mRNA表达水平显著升高，两组表达的Trx-1和Trx-1 mRNA峰值提前移，M1组和M2组6h时点即达高峰，而A组12h时点才达峰值；M1组和M2组之间血清和胰腺组织的Trx-1及(或)Trx-1mRNA水平无显著差异。与C组比较，A组大鼠血清IL-6、MDA的含量和胰腺组织MDA、MPO的水平显著增高，血清T-SOD活力、GSH的含量显著降低；与A组比较，M1组和M2组大鼠血清IL-6、MDA的含量和胰腺组织MDA、MPO的水平显著降低，血清T-SOD活力、GSH的含量显著增高。M1组和M2组之间的IL-6、MDA、MPO、T-SOD活力及GSH的水平无显著差异。 结论：⑴Trx-1在ANP大鼠的血清水平呈现出随时间延长先低后高的趋势，提示，Trx-1的血清水平可作为评价急性胰腺炎的严重性与氧化应激的一个动态指标。Trx-1及Trx-1 mRNA在ANP大鼠的胰腺组织的表达显著升高，反映机体的自我保护机制，提示外源性Trx-1可能有助于胰腺组织应对氧化应激。⑵褪黑素前、后干预均能提高ANP大鼠的血清Trx-1水平和促进胰腺组织表达Trx-1及Trx-1mRNA，提示，褪黑素的抗氧化作用涉及Trx-1的表达。褪黑素干预可提高血清SOD、GSH水平，降低血清IL-6、MDA和胰腺组织MDA、MPO水平，而且能降低实验性ANP胰腺病理变化的严重程度。表明褪黑素在ANP的发展过程中对大鼠起保护作用。提示，褪黑素可能作为一种新的治疗策略，改善ANP的预后。其作用机制可能与褪黑激素增强抗氧化剂如Trx-1、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽表达有关。

目录

论文说明：缩略词表

声明

第一部分硫氧还蛋白-1在实验性急性坏死性胰腺炎大鼠的表达

摘要

ABSTRACT

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第二部分褪黑素干预对硫实验性急性球死性胰腺炎大鼠表达硫氧还蛋白-1的影响及对大鼠的保护作用

摘要

ABSTRACT

前言

材料与方法

结果

1.四组大鼠胰腺组织的病理变化

2.四组大鼠血清淀粉酶浓度的变化

3.四组大鼠血清Trx-1的含量变化

4.四组大鼠胰腺组织Trx-1表达水平变化(免疫组化)

5.四组大鼠胰腺组织Trx-1mRNA的表达(RT-荧光PCR)

6.四组大鼠血清IL-6的含量变化

7.四组大鼠血清T-SOD活力变化

8.四组大鼠血清GSH的含量变化

9.四组大鼠血清MDA的含量变化

10.四组大鼠胰腺组织MDA的含量变化

11.四组大鼠胰腺组织MPO的含量变化

讨论

小结

参考文献

综述：硫氧还蛋白与胰腺炎

致谢

攻读学位期间发表的学术论文