林间松墨天牛的诱捕及其所携带松材线虫的快速检测和疑似病木的早期诊断

摘要

松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus，PWN)是松材线虫病的病原物，是松树的毁灭性病害。近年来严重地威胁着我国和世界的林业安全，并且依然呈扩展蔓延趋势，对森林资源、生态环境、社会经济造成了巨大的损失。松材线虫被世界上许多国家列为检疫对象，在我国属于二级检疫对象。 松墨天牛(Monochamus alternatus)是松材线虫病最主要的传播媒介昆虫，也是危害松树的主要蛀干害虫。利用引诱剂诱杀方法降低松墨天牛种群数量，监测其种群动态及携带松材线虫的情况，是防治松材线虫病的有效措施。然而松材线虫与其弱致病性的有效近缘种拟松材线虫(B.mucronatus)形态相似，并常混生于天牛及松树体内，传统的鉴定方法很难将两者快速区分。应用标准、快速、准确、灵敏的方法检测松材线虫对于保护林业安全具有重要的现实意义。 松材线虫病的发生是“寄主松树-媒介天牛-病原线虫”三者间复杂的侵染循环，本论文在导师的指导下，围绕松墨天牛、松材线虫及寄主病木展开研究。本研究对在2008年4月至9月间于福建某城市林区应用松墨天牛引诱剂和诱捕器诱获的大量松墨天牛的种群密度及其携带线虫的情况进行了调查与监测，并发展了新的分离松墨天牛所携带的线虫的方法；应用实时荧光PCR技术对天牛身体上的的松材线虫进行快速检测，对松墨天牛携带松材线虫的情况展开普查；在松材线虫早期检测管-实时荧光PCR快速检测体系的基础上对诱捕到松墨天牛的林区诱虫点附近的疑似病木进行诊断，确诊病木感染了松材线虫病，利用该诊断体系，发现疑似病木后，最快能在6小时内确诊是否感染松材线虫，与现行的鉴定方法相比，更符合快速诊断的要求。并对检测管引诱松材线虫的速度及温度对检测管引诱结果的影响等作了初步的观测。 本研究将松材线虫的早期诊断、快速检测技术成功地应用于实际的检疫和防治工作中，为松材线虫病的总体预警与防控策略提供了依据。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章绪论

1松材线虫病概述

1.1松材线虫病的发生与危害

1.2松材线虫病发病规律及症状

1.3松材线虫与其近缘种的关系

2松墨天牛概述

3松材线虫检测技术

3.1形态学鉴定

3.2生物化学诊断

3.3分子检测技术

4荧光PCR技术

4.1荧光染料技术

4.2荧光探针技术

第二章松墨天牛携带线虫情况调查

1引言

2材料与方法

2.1实验材料

2.2实验方法

3结果与分析

3.1松墨天牛引诱情况

3.2天牛携带松材线虫情况

4诱捕天牛超声波处理实验

4.1实验材料与方法

4.2实验结果

5讨论

5.1诱获的松墨天牛种群数量变化

5.2诱捕到的松墨天牛情况

5.3诱捕器及引诱剂的诱捕效果

5.4诱获天牛的固定处理

5.5实际应用及后续工作

第三章松墨天牛携带松材线虫的快速检测

1引言

2材料与方法

2.1试验材料

2.2实验方法

3结果与分析

3.1荧光PCR分析

3.2松墨天牛体内检获线虫的荧光PCR鉴定

3.3荧光PCR检测携带线虫的天牛组织

4讨论

4.1荧光PCR快速检测体系实际应用的可能性

4.2天牛体内携带松材线虫的情况

4.3荧光PCR检测携带线虫的天牛的部分组织

第四章松材线虫病疑似病木的早期诊断

1引言

2材料与方法

2.1实验材料

2.2实验方法

3结果与分析

3.1疑似病树调查结果

3.2荧光PCR对阳性松木感染病原线虫的检测

3.3检测管引诱时间效率实验

3.4温度对检测管引诱效果的影响

4讨论

4.1松材线虫早期检测管

4.2荧光PCR对阳性松木感染病原线虫的检测

4.3检测管引诱松材线虫的效率

4.4温度对检测管引诱效果的影响

总 结

参考文献：

致谢