人参皂甙Rb1/Rg1对高表达GSK3β的SH-SY5Y细胞TaU磷酸化和微管乙酰化水平的影响

摘要

目的：构建高表达糖原合成激酶3p(GSK3p)的SH-SY5Y转基因细胞模型，观察GSK3β高表达对tau蛋白磷酸化、微管稳定性的影响；研究人参皂甙Rbl和Rgl减轻高表达GSK3p的SH-SY5Y细胞tau过度磷酸化，提高高表达GSK3β的SH-SY5Y细胞微管稳定性的作用。 方法：构建GSK3p真核表达质粒，转染SH-SY5Y细胞，使GSK3β在SH-SY5Y细胞中得到高表达，应用蛋白免疫印迹方法，观察tau磷酸化、总Tau、微管蛋白乙酰化的水平，了解GSK-3β在SH-SY5Y细胞中高表达对tau过度磷酸化、微管稳定性的作用。随后，使用一定浓度的人参皂甙Rbl、Rgl或GSK．3β特异性抑制剂氯化锂(LithiumChlorine，LiCI)处理高表达GSK3β的SH-SY5Y细胞，观察人参皂甙Rbl和Rgl能否减轻tau蛋白磷酸化，稳定微管结构。 结果：GSK3β真核表达质粒转染SH-SY5Y细胞36小时后，GSK3p在SH-SY5Y细胞中的表达达到高峰，tau蛋白Serl99／202、Thr231、Thr205等位点的磷酸化水平在转染后48小时达到高峰：tau蛋白总量未有明显变化。转染后60小时，微管蛋白乙酰化水平明显减低。用人参皂甙Rbl、Rgl或GSK-3β特异陛抑制剂LiCl处理高表达GSK3β的SH-SY5Y细胞12小时后，可减轻tau蛋白过度磷酸化，tau蛋白总量降低；24小时后，微管蛋白乙酰化水平明显增加。 结论：GSK3β真核表达质粒转染SH-SY5Y细胞，成功地建立tau蛋白过度磷酸化的转基因细胞模型；而GSK-3β是诱导tau蛋白过度磷酸化的关键分子，陡tau蛋白的磷酸化水平增高，从而降低tau蛋白结合、稳定微管蛋白的能力，导致微管稳定性降低，微管蛋白乙酰化水平明显减低。10μmol／L人参皂甙Rb1和20μmol／L人参皂甙Rgl均能够减轻GsK3p高表达诱导的tau蛋白过度磷酸化，稳定细胞微管的结构。

目录

英文缩略词表

摘要

引言

第一部分糖原合成激酶3β真核表达载体的构建与鉴定

第二部分高表达GSK-3β对SH-SY5Y细胞tau蛋白磷酸化和微管稳定性的影响

第三部分人参皂甙Rb1/Rg1对高表达GSK3β的SH-SY5Y细胞tau磷酸化和微管稳定性的影响

结论

参考文献

β分泌酶在β-淀粉样蛋白代谢中作用的研究进展

致谢