不同柑桔品种对柑桔衰退病病毒分离株构成的影响

摘要

柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus，CTV)引起的柑桔衰退病，严重威胁着世界柑桔的发展。该病害主要通过蚜虫和嫁接传播，而我国CTV及其强力传媒褐色橘蚜(Toxoptera citricida Kirkaldy)广泛分布。目前我国柑桔的栽培面积和产量分别居世界第一位和第二位，随着柚类、甜橙类和杂柑类的种植比例日趋增大，茎陷点型衰退病在柚类、敏感的甜橙和杂柑类的危害日益严重，已经成为生产上突出问题。依据国外经验，在CTV强毒株和褐色桔蚜共存的地区，弱毒株交叉保护技术(MSCP)是防治柑桔茎陷点型衰退病最有效的措施。由于MSCP往往具有品种和地域专化性，了解不同品种对CTV分离株和不同来源的毒源株系的分布和互作规律，为弱毒株交叉保护的应用提供有力的参考依据。 本研究应用直接组织点免疫(DTBIA)对田间植株和原原种保存圃植株进行初筛，选用五大类13个阴性样品植株作为寄主，将不同来源的CTV强毒分离株CT14(1组群)、C13&(1+3+6组群)和CTl7(1+3组群)接种在上面。DTBIA检测后的阳性样品，应用反转录—多聚酶链式反应(RT—PCR)扩增CTV分离株的衣壳蛋白基因(CPG)，结合限制性内切酶HinfⅠ对PCR产物进行限制性片段多态性(RFLP)和单链构象多态性分析(SSCP)，同时对部分亚分离株进行p25基因序列测定。主要研究结论有： 1．RFLP分析：对DTBIA检测为阳性的亚分离株进行了RFLP分析，其中单一组群的毒源分离株(CT14，第1组群)嫁接到不同柑桔品种以后，RFLP组群未发生改变；混合组群CT36(1+3+6组群)嫁接到不同柑桔品种以后，RFLP组群发生了一定的改变，在柚类寄主上p25/HinfⅠ RFLP为第1组群、第6组群和3+6混组群三种形式，杂柑上p25/HinfⅠ RFLP为第6组群和3+6混组群两种组群形式，宽皮柑桔和甜橙是3+6混组群。混组群CT17(3+6组群)接种至不同寄主品种后，在柚类品种CTV亚分离株的p25/HinfⅠ RFLP为第3组群和1+3混组群，在杂柑上为第1组群和1+3混组群，甜橙上为第1组群、第3组群和1+3混组群三种形式，在宽皮柑桔上为第1组群、第3组群和1+3混组群三种形式。 2．SSCP分析：CT17、CT36混组群接种在不同寄主品种上SSCP图谱差异明显，分别出现2、4、6和8条谱带，表现多态性。 3．P25基因序列分析：对接种毒源CT17变异后的单组群亚分离株进行序列分析比对，不同CTV株系来源的相同变异组群亚分离株4-1、4-4、4-19、4-24、4-25和4-30在CPGs同源性为100％，4-12、4-34、4-38和4-42四个亚分离株的同源性为100％。第3组群的4-12与第1组群的3个亚分离株同为一簇，在进化树上有细微差异，再次验证隐藏的株系不一定消失；第1组群和第3组群的亚分离株同为一分枝上两簇，同源性较近。 4．生物学特性分析：不同品种接种CTV后的亚分离株表明，凤凰柚、沙田柚对茎陷点型衰退病敏感，一年生苗木上可表现症状；蜜奈夏橙、琯溪蜜柚、强德勒红心柚、岩溪晚芦、红桔、天草和不知火等品种症状不明显。田间脱毒苗木不同砧穗组合检测结果说明脱毒苗木不能阻止CTV的发生，且能在很短的时间内感染。

目录

文摘

英文文摘

声明

第1章文献综述

1.1柑桔的分类地位

1.2国内外柑桔品种现状

1.3 CTV

1.4小结

第2章引言

第3章材料与方法

3.1试验材料

3.2试验方法

第4章结果与分析

4.1 DTBIA初筛及检测

4.2P25/PT-PCR检测

4.3不同品种CTV分离株的P25/Hinf I RFLP分析

4.4 P25基因的SSCP分析

4.5序列测定及分析

4.6接毒后各品种的生物学特性调查

第5章结论与讨论

5.1结论

5.2讨论

参考文献

附录

致谢

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