骨髓间充质干细胞、银杏提取物及电针治疗多发性硬化的机理探讨

摘要

多发性硬化(MS)是中枢神经系统的一种慢性炎性脱髓鞘疾病，常常出现瘫痪、失明等神经系统损伤症状。本病好发于青壮年，病程长，反复发作，迁延不愈，是世界公认的疑难病之一。由于MS详尽的发病机制目前仍属未知，故现阶段无肯定而有效的防治措施。临床治疗MS以激素和免疫抑制剂为主，但是长期应用激素和免疫抑制剂带来很大副作用，且费用较高，停药后常出现症状反弹或加剧。因此研究和探讨MS的病因、病机，寻找有效的防治措施有着重要的理论意义和实用价值。 本研究应用免疫组织化学、分子生物学、电镜及流式细胞分析等多项技术探讨：①骨髓间充质干细胞(BMSCs)向少突胶质样细胞定向分化的潜能：②银杏提取物(GBE)治疗慢性脱髓鞘模型PLP转基因鼠的应用前景和机制；③电针血清对体外培养小胶质细胞活性的影响，以期为MS的病因和发病机制及临床治疗提供实验依据。 1.F3/Noteh信号系统诱导人骨髓间充质干细胞向少突胶质样细胞定向分化 方法： 贴壁分离得到的hBMSCs经β-ME(24h)和RA(3d)预诱导后，分为MFS组(5mM forskolin、10ng/ml bFGF、5ng/mlPDGF、200 ng/mL,HRG；阳性对照组)和F3组再继续培养3d，应用流式细胞术、免疫荧光染色、Luciferase分析不同诱导阶段细胞的生物特性。随后将RA/β-ME、MFS/SA/β-ME和F3/RA/β-ME诱导后的细胞移植入小鼠玻璃体腔，采用免疫荧光染色及电镜技术观察体内移植后细胞的形态特征和功能。 结论： hBMSCs具有跨胚层向少突胶质细胞分化的潜能，F3通过激活F3/Notch信号系统促使CD90(+)hBMSCs来源的OLLCs形态及功能成熟。 2．银杏提取物对PLP转基因鼠的影响 方法： 将3月龄plp<'tg/->小鼠分为PLP组(对照组)和GBE组(治疗组)，GBE组plp<'tg/->小鼠每日腹腔注射GBE(70mg/kg)，PLP组plp<'tg/->小鼠每日腹腔注射同样剂量生理盐水，治疗2个月，进行行为学检测及免疫组化染色分析。同时体外培养少突胶质细胞系OLN细胞，应用MTT法和免疫荧光染色直接观察GBE对少突胶质细胞的影响。 结论：GBE可能主要通过抑制小胶质细胞激活，减少CD4+T细胞的炎症性浸润，从而延缓plp<'tg/->小鼠脱髓鞘进程，提示GBE对MS的防治具有应用前景。 3．电针血清对体外培养小胶质细胞活性的影响 方法： 采用100HZ高频电针针刺正常大鼠百会、风府两穴，电针两周后取血制备电针血清。将体外培养的小胶质细胞分为三组，正常组加入正常大鼠血清，对照组加入正常大鼠血清和小胶质细胞激活剂LPS(1μg/ml)，电针组加入电针大鼠血清和LPS(1μg/ml)，通过免疫组化、MTT和Griess法分别观测8h、12h、24h和48h不同时间小胶质形态、活性及NO释放量。 结论： 电针血清可能通过抑制小胶质细胞活化以及释放NO，从而保护少突胶质细胞。 通过上述实验本文得出如下结论： 1．应用F3/RA/β-ME能够诱导CD90(+)hBMSCs分化为04(+)OLLCs，F3通过激活F3/Notch信号系统促使OLLCs分化成熟。 2．玻璃体腔移植F3诱导的OLLCs能够使移植细胞形态进一步成熟，并形成单层髓 鞘包绕轴突。 3．GBE能够提高plp<'tg/->小鼠的存活率，改善动物临床症状。 4．GBE可能通过抑制小胶质细胞激活减少CD4+T细胞的炎症性浸润，延缓plp<'tg/->小鼠的脱髓鞘病变。 5．GBE能够促进OLN细胞增殖，但不能诱导其分化为成熟少突胶质细胞。 6．电针血清能够抑制小胶质细胞活化及增殖，减少激活的小胶质细胞释放NO。 本研究首次应用F3/RA/β-ME成功诱导hBMSCs分化为少突胶质样细胞，为细胞移植治疗MS提供了实验依据；首次报道GBE对PLP转基因鼠的影响，阐明GBE对MS的防治具有应用前景。

目录

论文说明：英文缩略词

第一部分文献综述

综述一少突胶质细胞发育的研究进展

1少突胶质细胞的发生

2少突胶质细胞的起源

3少突胶质细胞的迁移

4少突胶质细胞增殖分化的影响因素

5 Notch信号系统调节少突胶质细胞的发育

6结论

参考文献

综述二多发性硬化的中西医研究进展

1病因

2动物模型

3发病机制

4临床治疗

5总结

参考文献

第二部分实验研究

前言

实验一F3/Notch信号系统诱导人骨髓间充质干细胞向少突胶质样细胞定向分化

前言

1材料与方法

2结果

3讨论

结论

参考文献

实验二银杏提取物对PLP转基因鼠的影响

前言

1材料与方法

2结果

3讨论

结论

参考文献

实验三电针血清对体外培养小胶质细胞活性的影响

前言

1材料与方法

2结果

讨论

结论

参考文献

小结

附图

致谢

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