巯嘌呤甲基转移酶遗传多态性及其对成人急淋白血病巯嘌呤化疗耐受性的影响

摘要

目的：研究我国成人急性淋巴细胞白血病(acutelymphoblasticleukemia，ALL)患者及健康汉族人群巯嘌呤甲基转移酶(thiopurinemethyltransferase，TPMT)基因多态性；建立一种简易的HPLC方法检测血红细胞TPMT的活性，并研究了健康汉族成年人和成人ALL患者TPMT活性分布；通过检测成人ALL患者6-巯基嘌呤(6-mercatopurine,6-MP)维持治疗中TPMT活性和基因型，临床观察药物毒性并调整药物剂量，分析该检测对6-MP化疗个体化的临床意义。 方法：第一部分：从78例成人ALL患者和154例健康汉族人外周血提取白细胞基因组DNA，采用等位基因特异性PCR(AS-PCR)和PCR结合限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)技术对TPMT*2、TPMT*3A、TPMT*3B和TPMT*3C的等位基因频率进行分析。第二部分：以非放射性S-腺苷-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine，SAM)为甲基供体，在体外红细胞裂解液中完成TPMT催化下的6-MP向6-甲基巯基嘌呤(6-methylmercatopurine，6-MeMP)的甲基化转变。孵育结束时，6-MeMP经乙酸苯汞混和物抽提。采用高效液相色谱法分析。TPMT的活性用37℃时每小时每毫升红细胞生成多少纳摩尔的6-MeMP来表示。第三部分：通过第一、二部分建立的方法检测20例成人ALL患者初诊时和6-MP维持治疗中TPMT活性和基因型，临床观察药物毒性并调整药物剂量，分析TPMT遗传多态性对成人急淋白血病巯嘌呤维持化疗耐受性的影响。 结果：第一部分：在成人ALL患者和健康汉族人中仅检测到6例TPMT*3C杂合子，没有检到TPMT*2、TPMT*3A和TPMT*3B。成人ALL患者TPMT总的突变型等位基因频率(1.28％)与健康汉族人群(1.30％)相近。第二部分：HPLC方法测定6-MeMP线性范围为20-1280μg·L-1(r=0.9995，n=7)，最低检测浓度0.01mg·L-1；高、中、低三种浓度的平均回收率为92.3％，日内及日间变异均＜8％。健康汉族成人和成人ALL患者TPMT活性均呈正态分布，前者活性范围为5.12～22.41units/mlpRBC，平均活性为(13.46±2.90)units/mlpRBC；后者活性范围为8.13～20.86units/mlpRBC，平均活性为(13.31±2.55)units/mlpRBC。男性和女性相比，TPMT活性没有显著性差异。健康汉族成人与成人ALL患者服用6-MP前TPMT活性相比没有显著性差异。而TPMT*3C杂合子TPMT平均活性低于野生型TPMT基因(TPMT*1)纯合子，差异有显著性。第三部分：20名成人ALL患者中有2例酶活性较低的TPMT*3C杂合子，未发现其它突变基因型。服用6-MP维持治疗(2周后)的成人ALL患者TPMT活性(15.96±3.44units/mlpRBC)显著高于初诊时(13.20±2.96units/mlpRBC)。20名患者中有2人因为血液毒性和肝毒性不耐受标准剂量的6-MP维持治疗。 结论：1.TPMT*3C可能是中国成人ALL和健康汉族人群最主要的突变型等位基因；2.TPMT活性在健康汉族成人和成人ALL患者均呈正态分布，TPMT基因型和表型存在相关性，TPMT*3C杂合子平均酶活性低于野生型TPMT基因(TPMT*1)纯合子；3.成人ALL患者服用6-MP维持治疗(2周后)TPMT活性高于初诊时；在开始包含巯嘌呤类药物的化疗方案治疗前，给予检测TPMT基因型和活性会对汉族成人ALL患者临床治疗有益。

目录

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英文缩略词表

摘要

前言

第一部分：成人急性淋巴细胞白血病巯嘌呤甲基转移酶基因多态性研究摘要

第一部分：成人急性淋巴细胞白血病巯嘌呤甲基转移酶基因多态性研究英文摘要

第一部分：成人急性淋巴细胞白血病巯嘌呤甲基转移酶基因多态性研究1引言

第一部分：成人急性淋巴细胞白血病巯嘌呤甲基转移酶基因多态性研究2材料与方法

第一部分：成人急性淋巴细胞白血病巯嘌呤甲基转移酶基因多态性研究3结果

第一部分：成人急性淋巴细胞白血病巯嘌呤甲基转移酶基因多态性研究4讨论

第一部分：成人急性淋巴细胞白血病巯嘌呤甲基转移酶基因多态性研究5小结

第一部分：成人急性淋巴细胞白血病巯嘌呤甲基转移酶基因多态性研究参考文献

第二部分：成人急性淋巴细胞白血病患者巯嘌呤甲基转移酶活性研究摘要

第二部分：成人急性淋巴细胞白血病患者巯嘌呤甲基转移酶活性研究英文摘要

第二部分：成人急性淋巴细胞白血病患者巯嘌呤甲基转移酶活性研究1引言

第二部分：成人急性淋巴细胞白血病患者巯嘌呤甲基转移酶活性研究2材料和方法

第二部分：成人急性淋巴细胞白血病患者巯嘌呤甲基转移酶活性研究3结果

第二部分：成人急性淋巴细胞白血病患者巯嘌呤甲基转移酶活性研究4讨论

第二部分：成人急性淋巴细胞白血病患者巯嘌呤甲基转移酶活性研究5小结

第二部分：成人急性淋巴细胞白血病患者巯嘌呤甲基转移酶活性研究参考文献

第三部分：以TPMT活性与基因型检测指导成人ALL维持治疗个体化的初步研究摘要

第三部分：以TPMT活性与基因型检测指导成人ALL维持治疗个体化的初步研究英文摘要

第三部分：以TPMT活性与基因型检测指导成人ALL维持治疗个体化的初步研究1引言

第三部分：以TPMT活性与基因型检测指导成人ALL维持治疗个体化的初步研究2材料和方法

第三部分：以TPMT活性与基因型检测指导成人ALL维持治疗个体化的初步研究3结果

第三部分：以TPMT活性与基因型检测指导成人ALL维持治疗个体化的初步研究4讨论

第三部分：以TPMT活性与基因型检测指导成人ALL维持治疗个体化的初步研究5小结

第三部分：以TPMT活性与基因型检测指导成人ALL维持治疗个体化的初步研究参考文献

第三部分：以TPMT活性与基因型检测指导成人ALL维持治疗个体化的初步研究对课题的进一步设想:

附录

致谢

综述：疏嘌呤甲基转移酶药物遗传学研究进展