马鞭草有效成分体外对多药耐药性人绒毛膜癌的耐药逆转作用及相关机制研究

摘要

人绒毛膜癌(以下简称绒癌)是一种高度恶性的滋养细胞肿瘤，早期即发生血行转移。自有效的化疗药物问世以来，绒癌的治愈率达80％～90％，但近年来随着多药耐药性绒癌病例的不断增多，常导致化疗失败。肿瘤耐药的产生是多因素、多机制参与的结果，现已发现许多化合物在体外能够逆转肿瘤多药耐药，但在临床试验中出现严重的毒副作用，使其应用受到限制。4’-甲醚-黄芩素(4’-M-S)是从中药马鞭草中提取的一种有效成分，为黄酮类化合物，体外研究已经证实，其对人绒癌JAR细胞具有特异性的增殖抑制作用。本文以JAR/VP16耐药细胞株为研究对象，初步探讨4’-M-S的耐药逆转作用及相关机制，以期为耐药性绒癌治疗奠定实验基础。研究分两部分： 一、4’-甲醚-黄芩素对人绒毛膜癌耐药细胞株JAR/VP16的耐药逆转作用研究采用MTT法测得4’-M-S对IAR/VP16细胞有显著增殖抑制作用，且呈剂量依赖；20μg/ml浓度下可显著逆转JAR/VP16细胞对足叶乙甙(VP16)的耐受性，逆转倍数及逆转效率分别为5.02、81.19％；与单用VP16相比，4’-M-S联合VP16作用于JAR/VP16细胞后，用单克隆抗体酶免定量法测得耐药细胞hCG分泌量明显降低；流式细胞术分析结果显示，细胞周期明显阻滞于G<,2>/M期，细胞凋亡率有所增高；光镜、透射电镜观察到耐药细胞出现形态不规则、胞质空泡化、染色质浓缩边聚等早期凋亡形态学特征。以上结果说明，4’-M-S能有效逆转JAR/VP16对VP16的耐受性，其可能的机制是抑制耐药细胞的增殖，并诱导细胞凋亡。 二、4’-甲醚-黄芩素对人绒毛膜癌耐药细胞多药耐药的逆转机制研究4’-M-S作用后流式细胞术检测，耐药细胞内罗丹明潴留明显增加；RT-PCR结果显示，耐药细胞中mdrl mRNA的表达下降；Westernblot及免疫组化结果表明，mdrl mRNA的产物P-gp表达也下降。由此可知，4’-M-S对JAR/VP16细胞多药耐药性的逆转机制与抑制mdrlmRNA及其产物P-gp表达、降低P-gP的外排及增加细胞内化疗药物的浓度有关。 综上所述，本文以人绒癌耐药细胞株为研究对象，通过多种实验手段，证明4’-M-S能够有效逆转JARJVP16细胞对化疗药物的耐受性，并能下调mdrl mRNA及其产物P-gp的表达、减少药物的外排、诱导细胞凋亡。

目录

论文说明：中英文对照

声明

前言

研究内容

第一部分：4'-甲醚-黄芩素对人绒毛膜癌耐药细胞株多药耐药性的耐药逆转作用研究

1、材料

2 方法

3 结果

4 讨论

参考文献

第二部分：4'-甲醚-黄芩素对人绒毛膜癌耐药细胞株多药耐药性的逆转机制研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

参考文献

小结

综述

致谢