自拟凉血消疕汤治疗寻常型银屑病临床观察及其作用机制研究

摘要

目的： 1.观察凉血消疕汤治疗寻常型银屑病的临床疗效及安全性。 2.通过体外传代培养人永生化角质形成细胞株(HaCaT)，观察不同浓度凉血消疕汤含药血清对HaCaT细胞增殖、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响并探讨其治疗银屑病的作用机制。为凉血消疕汤在临床的广泛应用提供理论基础。 方法： 一．观察凉血消疕汤治疗寻常型银屑病的临床疗效 1.病例来源2005年8月-2008年3月武汉市第一医院皮肤科银屑病专科门诊患者，临床诊断寻常型银屑病，皮损面积小于30％体表面积，就诊前一月未经口服中药治疗未接受免疫抑制剂治疗的患者46例。 2.患者按随机数字表法分为2组，两组在年龄、性别、病程、严重程度上无显著性差异(P>0.05)，具有可比性。治疗组26例服用凉血消疕汤，每日一剂，分两次口服。对照组20例服用郁金银屑片，每日3次，每次4片。局部治疗二组均采用10％煤焦油软膏。每2周为1疗程，连续观察8周后根据银屑病皮损面积和严重度指数PASI评分系统，来评价临床疗效。同时监测患者血尿常规，肝肾功能，记录不良反应。 3.观察结束后采用SPSS14.O软件系统对结果进行分析。 二．观察不同浓度凉血消汤含药血清对HaCaT细胞增殖及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响 1、体外培养HaCaT细胞传至第三代备用。当细胞融合80％以上时，加入0.25％胰酶消化，37℃、5％CO2培养箱中孵育5min，倒置显微镜下观察细胞形态，细胞变圆，细胞间连接中断，加入适量培养基终止消化，轻轻吹打瓶壁使细胞呈单细胞悬液，添加适量培养基吹打混匀，接种至96孔板备用。 2、大鼠灌胃制备盐水，低、中、高剂量凉血消汤血清分别作用于HaCaT细胞。将24只大鼠随机分为4组，空白对照组(生理盐水)，凉血消疕汤低、中、高剂量组(0.5g/ml、1g/ml、2g/ml)，每组6只，雌雄各半。给药组，每天灌胃给药一次，连续7天；对照组，每天灌服等量生理盐水。具体灌胃剂量按照《中医科研设计与统计学》(湖南科学技术出版社48实验动物给药方法52中药血清药理学方法)计算。末次灌胃1h后取血，分离血清，-20℃冰箱保存备用。 3、采用MTT法观察凉血消疕汤含药血清对细胞增殖影响。调整细胞数至2×104的密度接种于96孔板，细胞70％-80％融合后弃去原培养液，加入无血清的DMEM培养基培养4小时后去上清，加入各组受试品，在酶标仪上测OD值。 4、运用ELISA法检测上清液中VEGF的表达，调整细胞数至1×105接种于24孔板，细胞70％-80％融合后弃去原培养液加入各组受试品，培养24小时后取上清按照人VEGF ELISA试剂盒(深圳晶美)步骤操作。 结果： 一.临床观察 根据PASI评分下降比值，治疗组痊愈率7.69％，显效率57.69％，总显效率65.38％；对照组痊愈率5％，显效率30％，总显效率35％；治疗组总显效率高于对照组，经统计学分析差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前，治疗组患者PASI评分9.64±3.86，对照组PASI评分9.58±2.48。治疗后，治疗组患者PSAI评分4.23±3.55，对照组患者PASI评分5.48±3.83，两组患者治疗后总评分比较差异有显著统计学意义(P<0.01)，治疗组优于对照组。 二.实验研究 1.抑制细胞增殖：各实验组分别作用HaCaT细胞24小时后，HaCaT细胞组OD492为0.961±0.028，TGF-α刺激HaCaT细胞组OD492为1.163±0.073，生理盐水大鼠血清组OD492值为1.098±0.067，低、中、高含药血清组OD492值分别为0.908±0.041、0.914±0.096、0.553±0.159，TGF-α刺激空白组OD492值明显高于空白组OD492(P<0.05)随药物浓度梯度的升高，各含药血清组细胞增殖活性逐渐降低，与盐水组比较差异有统计学意义(P<0.05)，各加药组组间比较，低剂量组与中剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)，高剂量组与盐水血清组，低、中剂量组比较差异均有显著统计学意义(P<0.01)。 2.抑制VEGF分泌：各实验组分别作用HaCaT细胞24小时后，VEGF表达量HaCaT细胞组OD450值为0.473±0.142，TGF-α刺激HaCaT细胞组OD450值为1.007±0.261，生理盐水大鼠血清组OD450值为1.500±0.041，低、中、高含药血清组OD450值分别为1.185±0.133、0.964±0.403、0.33±0.067，TGF-α刺激HaCaT细胞组OD450。 值与HaCaT细胞组OD450值比较差异有显著统计学意义(P<0.01)，并且随着药物浓度梯度的升高，各含药血清组VEGF分泌量逐渐降低，与盐水组比较差异有显著统计学意义(P<0.01)，各加药组组间比较差异亦有显著统计学意义(P(0.01)。经相关回归分析显示，VEGF表达量与呈高度负相关，r=-0.998，P<0.01。提示以上各凉血消汤含药血清对HaCaT细胞VEGF分泌有明显抑制作用，且具有浓度效应关系。 结论： 1.凉血消疙汤对寻常型银屑病临床治疗作用显著，明显优于对照组。 2.凉血消汤含药血清能够抑制HaCaT细胞增殖，有效下调HaCaT细胞VEGF的分泌量，抑制VEGF表达，从而抑制血管新生，这可能是其临床治疗银屑病的药理作用机制之一。

目录

论文说明：中英文缩略词对照表

声明

前言

临床观察

1临床资料

2方法

3结果

实验研究

1材料和方法

2实验步骤

3结果

讨论

结语

参考文献

文献综述：祖国医学以中医治则组方治疗组方治疗银屑病作用机制的研究进展

致谢