牙龈卟啉单胞菌内毒素对牙周韧带细胞损伤愈合的影响

摘要

牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis，Pg）是公认的牙周炎的主要致病菌之一，其产生的内毒素（lipopolysaccharide，LPS）对牙周组织具有很高的毒性和抗原性，可导致牙周附着的丧失和牙槽骨的吸收。牙周韧带细胞（Periodontal Ligament Cells，PDLCs）作为牙周韧带内主要的功能细胞，在牙周的愈合和再生中发挥着重要的作用。大量的研究表明，牙龈卟啉单胞菌内毒素（Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide，Pg-LPS）能通过诱导炎症反应直接或间接地毒害PDLCs，且牙周病病变的发展与LPS的含量密切相关。血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor-BB，PDGF-BB）作为PDLCs潜在的促有丝分裂因子，在牙周组织的损伤愈合中发挥着重要的作用。 目的: 研究不同浓度Pg-LPS单独或联合PDGF-BB共同作用于PDLCs后对其损伤模型愈合的影响，以及通过研究Pg-LPS对PDLCs在牙骨质片上附着和增殖的影响，探讨Pg-LPS在牙周组织修复再生中的作用。 方法: 1.采用组织块培养法体外培养人PDLCs，免疫细胞化学检测波形丝蛋白以确定其组织学来源。取生长良好的第4代PDLCs接种于12孔板，待细胞融合后制备成约8mm的圆形损伤模型，加入0、0.001、0.01、0.1、1和10μg/ml的Pg-LPS培养液培养，3d后换成不含LPS的培养液继续培养，损伤后的第1、3、6、9、12d结晶紫染色观察损伤区细胞愈合情况。乙酸溶解提取后，检测损伤后各组细胞的数量变化；同时，ELISA法检测1d、3d、6d损伤愈合时PDLCs分泌IL-1β、IL-6、TNF-α水平的变化。 2.采用10ng/ml的PDGF-BB和Pg-LPS（0、1、10μg/ml）共同作用于PDLCs损伤模型，于损伤的第3d时，换成不含LPS而只含有PDGF-BB的培养液继续培养，检测损伤后的第1、3、6、9d各组细胞的数量及细胞覆盖损伤区域的情况。 3.用含不同浓度（0、1、10μg/ml）Pg-LPS培养液培养PDLCs于牙骨质片，24h、72h后用MTT法检测PDLCs在牙骨质片上的附着、增殖的细胞数量，扫描电镜观察其在牙骨质片上附着、增殖的形态。AO/EB染色观察不同浓度Pg-LPS对PDLCs凋亡的影响。 结果: 1.通过组织块法分离培养的PDLCs表达波形丝蛋白，属于中胚层来源的细胞，具有良好的增殖能力。低浓度Pg-LPS（0.001-1μg/ml）对PDLCs损伤愈合时细胞数量的增殖影响不明显（P>0.05）；而高浓度10μg/ml Pg-LPS对PDLCs的增殖有明显的抑制作用（P<0.05），延缓了PDLCs的损伤愈合。此外，10μg/mlPg-LPS组刺激PDLCs后，分泌的IL-1β、IL-6、TNF-α水平也明显高于其余各组（P<0.05），而低浓度Pg-LPS（0.001-1μg/ml）组与对照组相比则无明显差异（P>0.05）。 2.低浓度Pg-LPS（0.001-1μg/ml）对PDGF-BB促PDLCs损伤愈合无影响（P>0.05）；高浓度10μg/ml Pg-LPS抑制了PDGF-BB促PDLCs损伤愈合（P<0.05）。 3.在附着实验和增殖实验中，高浓度10μg/ml Pg-LPS组PDLCs细胞数量明显低于对照组（P<0.05），而1μg/mlPg-LPS组PDLCs细胞数量与对照组差异无统计学意义（P>0.05）。同样，10μg/ml Pg-LPS能诱导PDLCs的凋亡。 结论: 1.Pg-LPS对PDLCs的增殖抑制作用与其浓度有密切关系。 2.Pg-LPS在一定的低浓度范围内（0.001-1μg/ml），不会影响PDLCs在牙骨质片上的附着、增殖，提示在牙周炎治疗进行根面平整时，通过大量的刮除牙骨质来彻底地去除LPS可能是没有必要的。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英汉缩略词对照表

声明

前言

第一部分Pg-LPS对牙周韧带细胞损伤愈合的影响

第二部分Pg-LPS对血小饭衍生生长因子促牙周韧带细胞损伤愈合的影响

第三部分Pg-LPS对牙周韧带细胞在牙骨质片上附着和增殖的影响

全文总结

参考文献

综述:牙周优势菌内毒素对牙周韧带细胞生物学性状的影响

致谢