厚皮甜瓜果实RNA的提取及采后硅酸钠处理对其防卫基因的诱导表达

摘要

随着甜瓜采后诱导抗病性研究的深入，对防卫基因的诱导表达分析已成为亟待研究的内容。本文以厚皮甜瓜“银帝”(Cucumis melo L.cv.Yindi)为材料，对果实RNA的提取方法主要条件进行了筛选，并对果实中7个防卫基因在100mmol硅酸钠处理和Trichothecium roseum挑战接种下的表达模式进行了分析。结果表明： 1.1ml Trizol提取200mg果实量时可得到最多的RNA量，氯仿抽提2次可使所提取RNA的A260/A280在1.9-2.0之间，所提取的RNA无蛋白质和DNA污染。室温沉淀和低温沉淀对RNA的产量无明显差异。提取的RNA可顺利反转录，反转录产物稀释5倍后扩增β-actin基因片段与设计大小一致，验证了该方法提取的RNA可用于RT-PCR。 2.cDNA模板量在经过几次调整后，基本达到均一化，用标准Marker比较法验证了MCHT，PAL，SOD、POD、APX和LOX基因，用测序比对的法验证了CHS基因，并得到了甜瓜CHS基因片段序列。由此表明，用标准Marker比较法和测序比对的法可验证扩增的基因，设计的引物可做表达分析。 3. 硅酸钠处理和处理后的挑战接种提前了MCHT和SOD基因表达高峰2d，而且也提高了表达量；处理后的挑战接种提高了PAL和CHS基因的表达量；处理后POD基因表达高峰延长了2d，提高了挑战后POD基因表达量；APX和LOX基因表达明显可被硅酸钠处理抑制。由此表明，硅酸钠处理后诱导了果实的抗病性。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写表

声明

文献综述

1硅的存在及分布

2硅对作物病害的影响

3硅提高植物抗病性的机理

4抗病相关基因及RT-PCR技术应用

1前言

2材料与方法

2.1材料

2.2方法

3结果与分析

3.1Trizol用量对RNA提取效果的影响

3.2氯仿抽提和沉淀条件对RNA提取效果的影响

3.3 RT-PCR体系的建立

3.4半定量RT-PCR的模板均一化

3.5 MCHT、PAL、SOD、POD、APX和LOX基因扩增验证

3.6 CHS基因片段的获得

3.7基因表达模式分析

4讨论

4.1 RNA的提取和RT-PCR体系建立

4.2半定量RT-PCR的模板均一化

4.3甜瓜果实防卫相关基因的验证

4.4甜瓜果实防卫相关基因的表达分析及抗病机理

5结论

致谢

参考文献

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