靶向抑制转录因子Sp1阻断类癌血管生成的系列研究

摘要

[研究背景]血管生成是肿瘤转移的关键步骤和靶向治疗的研究重点。本研究拟评价核转录因子Spl作为抑制类癌血管生成高效靶点的价值；明确化疗药物光神霉素(Mithramycin-A)抑制Spl表达的分子机制；研究VEGF单克隆抗体BevacizLlmab(Avastin)阻断VEGF信号转导通路对Spl的影响；为开发兼顾转录因子Spl及其下游效应分子VEGF的“双重靶向治疗策略”提供实验依据。 [资料与方法]用免疫组化染色检测35例类癌组织中Spl表达，评价Spl表达与VEGF、微血管密度(MVD)等因素及患者预后的关系。用RNA干扰技术(RNAi)敲低2株类癌细胞(NCI-H727及B0N-1)SDl表达，观察该处理对VEGF表达的影响。用N0rtherrl blOt、westernbl0t及MTT方法评价光神霉素对类癌细胞Spl基因转录、翻译和细胞体外增殖的影响。用荧光素酶报告基因技术(Luciferase assay)检测光神霉素作用于Spl基因启动子的确切位点。利用裸鼠皮下移植瘤模型，评价BevacizLimab、光神霉素，以及两药联合方案对类癌生长及血管生成表型的影响。 [结果]Spl蛋白在类癌组织中呈高表达状态(74.3％，26/35)。Spl阳性表达与病灶大小、VEGF表达及MvD明显相关(P=0.003，P=0.002，P=0.012)；并与患者不良预后有关(P=0.025)。用siRNA下调spl表达后，VEGF表达随之下降。光神霉素可抑制类癌细胞SDl 基因转录与复制，并影响其体外增殖；上述效应均呈剂量依赖性和时间依赖。报告基因检测结果提示，光神霉素可抑制含2个spl结合位点 (TGGGcGG)的spl启动子片断活性(pGL3-FOR2)；对不含spl结合位点(pGL3-FORl)者则无此作用。体外培养环境下，Bevacizumab对类癌细胞生长及Spl、VEGF蛋白表达无影响；但可明显抑制裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成；并上调瘤体内spl及VEGF表达。加用光神霉素可纠正上述变化，并增强Bevacizumab的抑瘤效应。 【结论】Spl高表达状态与类癌血管生成及患者预后相关，可作为抑制肿瘤血管生成的理想靶点。光神霉素可抑制spl基因表达；Spl基因启动子区域高G／c含量的spl蛋白结合位点是该药物的作用靶点。BeVacizumab虽可有效抑制裸鼠类癌皮下移植瘤生长和血管生成，但可反馈性上调肿瘤细胞spl表达。联合应用Spl抑制剂光神霉素对Bevacizumab抑制类癌生长及肿瘤血管生成有协同效应。

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绪论

第一部分核转录因子Sp1作为抑制类癌血管生成高效靶点的研究

第二部分光神霉素(Mithramycin-A)抑制类癌细胞Sp1表达的分子机制研究

第三部分光神霉素(Mithramycin-A)联合VEGF单克隆抗体(Bevacizumab)抑制类癌血管生成的效应评价及机制研究

结论

参考文献

致谢

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