染料木黄酮对去势小鼠脾细胞凋亡及雌激素受体亚型表达的影响

摘要

背景：随着植物雌激素在围绝经期妇女中的广泛应用，有关它的研究也越来越多。关于植物雌激素，尤其是染料木黄酮(GEN)的免疫调节作用已引人注目。但关于染料木黄酮对免疫细胞凋亡及免疫细胞上雌激素受体亚型影响的研究仍很少。 目的：本研究拟观察并比较GEN和雌二醇(E2)对去势小鼠脾细胞凋亡及相关调控基因Fas、FasL的影响，同时比较GEN和雌二醇对雌激素受体亚型表达的影响，为染料木黄酮的临床应用提供理论和实验依据。 材料与方法: 本实验取10周龄BALB／C小鼠(由复旦大学实验动物部提供)，分为3组：去势组(行双侧卵巢切除术，OVX)、假手术组、青年对照组。去势组于术后5天起行阴道脱落细胞涂片，连续5天均未出现角化细胞为手术成功。假手术小鼠即将10周龄BALB／C小鼠双侧腹下区进腹取少量脂肪组织后关腹。OVX小鼠及假手术小鼠在术后第¨天与青年组同时无菌取脾，研磨，制备脾细胞悬液，假手术组及青年对照组脾细胞悬液放入未加药的培养液中，OVX小鼠脾细胞悬液放入含有不同药物的培养液中。根据培养液中所含药物及药物浓度的不同将OVX小鼠分为：去势+E2(10^-5umol／1、10^-4umol／l、lO^．3umol／、10A-2umol／四个浓度)、去势+GEN(3．7umol／1、18．5umol／l、37．0umol／1、92．5umol／1四个浓度组)、去势+溶剂(DMSO)组、去势空白对照组，共计12组。然后将标本放入培养箱(37~C、5~~C02)培养72h后，一部分细胞悬液采用Annexin-FITC、PI双重染色后流式细胞仪测定脾细胞凋亡率；另一部分细胞悬液待提取脾细胞总RNA，RT-PCR技术检测脾细胞上Fas、FasL凋亡基因及ERa、ERBmRNA的表达。 结论: 与青年对照相比，去势小鼠脾细胞凋亡率增加，Fas、FasL基因表达增加，ERa、ERβ基因表达降低。脾细胞凋亡的增加可能与Fas、FasL基因表达的增多有关。 与雌二醇相似，染料木黄酮在高浓度时，增加去势小鼠脾细胞的凋亡率，同时Fas、FasL基因的转录水平也升高。提示染料木黄酮、雌二醇致脾细胞凋亡可能与上调凋亡促进基因Fas、FasL基因表达有关。 低剂量的雌二醇脾细胞凋亡率及Fas、FasL基因与青年组无差异，低浓度染料木黄酮脾细胞凋亡率及Fas、FasL基因与青年组无差异，染料木黄酮和雌二醇均可能逆转去势小鼠脾细胞凋亡。 不同浓度雌二醇对脾细胞上ERa、ERB基因表达的影响体现了雌二醇对ER的双相调节作用：在生理范围内为正向调节作用，超生理范围为负向调节作用。高浓度染料木黄酮增加ERa、ERB基因表达。染料木黄酮对脾细胞凋亡及ERs的表达可能不完全通过ER途径调节。 实验结果提示临床上使用雌二醇或染料木黄酮时应该采用最小的有效剂量。

目录

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

致谢

综述

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