SLE患者外周血单个核细胞Tim-1及Tim-3基因的表达以及人Tim-3基因的克隆

摘要

Tim(T cell immuglobulin domain and mucin domain)基因编码的蛋白是一类具有共同基序的跨膜糖蛋白，其基本结构包括一个信号肽、免疫球蛋白样区、粘蛋白样区、跨膜区和有磷酸化位点的胞内区。Tim家族位于人染色体5q32.2，共包括3个基因，分别是Tim-1，Tim-3及Tim-4。Tim家族可能是Th1/Th2特异性表面标志，参与Th细胞的分化及免疫应答调节；Tim-1细胞主要表达在分化后的Th2细胞上，Tim-3只表达在分化后的Th1细胞上；Tim家族在自身免疫病中表达变化及SNP研究提示其参与自身免疫病发生。 系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种典型的自身免疫病，其特征是产生大量自身抗体和多系统受累。该病病因不明，以T细胞依赖性B细胞克隆活化和产生自身抗体、形成多种免疫复合物而导致组织损害为特征。Th细胞及其细胞因子在自身免疫病发病机制中有着非常重要的作用。有不少学者认为SLE是Th2型自身免疫病，但也有相反的观点，认为SLE患者血清中IFN-γ水平显著增加，而且Th1占优势可加速狼疮向自身免疫性疾病发展。Tim-1、Tim-3是否参与其中发生目前尚未见报道。 本研究通过荧光实时定量RT-PCR及半定量RT-PCR检测SLE患者外周血单个核细胞(peripheral blood monoculear cells，PBMC)Tim-1、Tim-3及其他相关因子的表达水平，探讨Tim-1、Tim-3表达与SLE相关性，并研究Tim分子的表达动力学，为进一步阐明SLE的发病机制及Tim与SLE的关系奠定基础。为进一步开展Tim-3相关研究，本研究的另一部分工作是克隆人Tim-3基因，为将来进一步表达并更深入研究该基因准备条件。第一部分sLE患者外周血单个核细胞Tim-1及Tim-3基因的表达 目的：通过荧光实时定量RT-PCR、半定量RT-PCR分析系统性红斑狼疮患者与健康对照者PBMC中Tim-1、Tim-3及其他相关细胞因子的表达差异，为进一步阐明SLE的发 病机制及Tim与SLE的关系奠定基础。 结论：SLE患者PBMC中Tim-1mRNA表达显著升高，与IL-lOmRNA表达呈正相关，提示SLE为Th2型自身免疫病；同时SLE患者PBMC中与免疫抑制相关的因子FoxP3及TGF-βl mRNA表达显著降低，Tim-3配体galactin-9表达显著升高，且T淋巴细胞增殖能力降低，提示SLE患者Thl/Th2失衡可能与上述因素有关。第二部分 人Tim-3基因的克隆 目的：克隆人Tim-3基因，为将来进一步表达并更深入地研究该基因奠定基础。 结论：成功构建了hTim-3-pGEM-T重组质粒，为将来深入研究人Tim-3基因奠定了基础。

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第一部分SLE患者外周血单个核细胞Tim-1及Tim-3基因的表达

第二部分人Tim-3基因的克隆

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