核酸检测技术在日本血吸虫感染宿主早期诊断及疗效考核中的应用研究

摘要

本研究拟在课题组在已成功建立PCR法检测日本血吸虫特异性DNA的研究基础上，进一步探索核酸检测技术在日本血吸虫病早期诊断及疗效考核中的应用。首先验证了PCR法对日本血吸虫感染家兔模型的不同组织样本(包括日本血吸虫成虫、虫卵、感染家兔的肝组织、粪便和外周血清)中日本血吸虫特异性DNA的检测结果，且进一步确定了PCR法检测的敏感性和特异性，结果显示其敏感性为80fg/μL的DNA水平，所检测的DNA片段是日本血吸虫特异的，与曼氏血吸虫及华支睾吸虫均无交叉反应。对感染家兔的血清DNA的检测结果证明了PCR法对日本血吸虫感染的早期诊断和疗效考核价值，即可从感染后第1w的血清中扩增出特异条带，于治疗后第12w即转为阴性，与以往研究结果基本一致。 在已建立的PCR法的基础上，本研究进一步建立了一种新型快速、灵敏的核酸检测法，即环媒介导的恒温扩增法(简称LAMP法)，并与PCR法比较检测的敏感性和特异性，结果表明，LAMP法的敏感性显著高于PCR法，约为PCR法的104倍，可扩增出极微量水平的DNA(0.08fg／μl)，亦未见与曼氏血吸虫、华支睾吸虫的交叉反应。在日本血吸虫感染家兔模型的早期诊断和疗效考核的实验中，LAMP法同样可从感染后第1w的血清中检测出阳性结果，对疗效考核的评价表明LAMP法在治疗后第13w时即转为阴性，较PCR法晚一周转阴，显示出其具有更高的敏感性。 为深入探讨日本血吸虫感染宿主血清中核酸物质的来源，本实验建单、双性感染小鼠模型进行研究。结果初步证实在日本血吸虫感染早期，血清中的核酸物质可能主要来源于移行过程中死亡的童虫以及虫体发育过程中更新脱落的表皮组织，而在感染的急性期和慢性期，小鼠血清中的核酸物质可能主要来源于虫卵的分解产物。从而为应用核酸检测法早期诊断日本血吸虫感染，尤其是为疗效考核提供了理论依据。 在动物模型实验研究的基础上，应用两种核酸检测法检测了30例日本血吸虫病慢性期病人血清。结果显示，PCR法可从30例病人血清中检测出18例阳性结果，阳性率为60％，而LAMP法可检测出29例阳性结果，阳性率为96.7％。研究结果表明LAMP法是一种特异而又灵敏的快速核酸检测技术，且其操作简便，结果判断直观，具有应用于血吸虫病的早期诊断和疗效考核的潜在价值，值得进一步深入研究。

目录

文摘

英文文摘

声明

引言

第一部分PCR法对日本血吸虫感染家兔血清DNA早期检测和疗效考核的评价

第二部分LAMP法反应体系的建立及与PCR法检测血清DNA的效果的比较

第三部分日本血吸虫感染宿主血清中核酸来源的研究

第四部分两种核酸检测法对日本血吸虫病病人血清DNA检测效果的初步评价

结论

参考文献

攻读学位期间出版或公开发表的论著、论文

附录 缩写词表

致谢