消瘀化痰饮对非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞凋亡的影响

摘要

目的：消瘀化痰饮(由泽泻、制半夏、丹参、郁金、柴胡、决明子、生黄芪、炒白术等组成)具有消痰化瘀、健脾疏肝功效，为导师临床观察筛选的效方，对非酒精性脂肪肝(NAFLD)具有较好的治疗效果，为了进一步探讨其作用机理，参照相关文献用高脂饲料喂饲大鼠复制NAFLD大鼠模型，同时施加药物干预，通过观察其对胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的影响，探讨了本方在调节脂质代谢和保护肝功能方面的作用机制；通过观察其对细胞凋亡及相关调控基因Bcl-2、Bax和caspase3蛋白表达的影响，探讨了其抗细胞凋亡的作用机制。并运用光镜和电镜观察了本方对肝脏组织形态学的影响。 方法 第一部分消瘀化痰饮对NAFLD大鼠脂质代谢和肝组织形态学的影响选用SD大鼠50只，体重160～180g，雄性。大鼠自由饮水进食，饲养于18℃～22℃明暗各12小时的清洁级动物实验室内。正常喂养一周后，随机分为5组：正常对照组(简称正常组)、模型对照组(简称模型组)、消瘀化痰饮高剂量组(简称高剂量组)、消瘀化痰饮低剂量组(简称低剂量组)、阳性药(东宝甘泰)对照组(简称对照组)。第二部分消瘀化痰饮对NAFLD大鼠肝细胞凋亡及相关调控基因的影响实验动物分组、用药情况同前。连续灌胃9周，确定脂肪肝形成后，于最后一次给药禁食12h后麻醉动物，剖取肝脏，在肝脏最大叶距边缘0.5cm处取少许肝组织，剪碎至1mm3大小，然后置于100目铜网上轻搓，边搓边以生理盐水冲洗，直至将组织搓完。收集细胞悬液，离心2min，弃去上清，去除细胞碎片，70％乙醇固定，运用流式细胞仪检测实验大鼠肝细胞增殖与凋亡及相关调控基因Bcl-2、Bax和Caspase3蛋白表达的情况。 结果： 第一部分消瘀化痰饮对NAFLD大鼠脂质代谢和肝组织形态学的影响1各组大鼠血清TG、TC、FFA的含量变化模型组大鼠血清TG、TC、FFA的含量(1.17±0.096、3.27±0.18、480.475±18.94)明显高于正常组(0.56±0.084、 第二部分消瘀化痰饮对非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞凋亡及相关调控基因的影响1各组大鼠肝细胞凋亡率的变化流式细胞仪检测结果显示：正常组肝脏细胞的凋亡率为(11.1±0.51)，模型组为(31.44±1.12)，模型组显著高于正常组(P<0.01)；消瘀化痰饮高、低剂量组与阳性药对照组分别为(15.43±0.70、17.29±0.83、20.41±0.88)，均比模型组有了明显的下降(P<0.01)。 2各组大鼠肝细胞增殖周期的变化模型组G0/G1期(81.63±5.85)细胞百分率较正常组(75.71±4.24)升高(P<0.01)；而S期(11.51±1.85)和G2/M期(7.15±0.51)细胞百分率均较正常组(14.78±1.12、9.34±0.65)降低(P<0.05)。经用药干预后，高、低剂量组及对照组G0/G1期(73.17±6.70、74.54±4.98、75.56±2.54)细胞百分率明显低于模型组(P<0.01)；而高、低剂量组及对照组S期(15.21±1.93、15.34±1.42、13.69±1.70)和G2/M期(11.62±1.09、11.39±1.22、11.12±1.18)细胞百分率显著高于模型组的S期(11.51±1.85)和G2/M期(7.15±0.51)，(P<0.05或P<0.01)。高、低剂量组与对照组之间各项指标变化无明显差异(P>0.05)。 模型组细胞增殖指数(18.61±1.96)较正常组(24.12±2.19)降低(P<0.01)；经用药干预后，高、低剂量组及对照组的细胞增殖指数(26.84±2.11、26.74±2.58、24.81±2.54)较模型组明显增高(P<0.01)，表明各治疗组细胞增殖速度高于模型组。其中，高、低剂量组细胞增殖指数均高于对照组(P<0.05)，但高、低剂量组之间无明显差异(P>0.05)。 结论 1消瘀化痰饮能显著降低实验大鼠血清和肝组织内异常升高的TC、TG、FFA的含量，抑制血清内ALT和AST活性的异常升高，具有良好的调脂护肝作用。 2消瘀化痰饮可明显改善NAFLD大鼠肝组织的病变程度，表现为用药后大鼠肝小叶和肝血窦结构清晰，肝细胞内脂滴空泡基本消失；线粒体形态基本恢复正常。 3消瘀化痰饮可使NAFLD大鼠肝组织的Bcl-2基因蛋白表达量增加，Bax和Caspase3基因蛋白表达量降低，细胞凋亡率下降，肝组织中静止期细胞减少，而增殖期细胞增多，非增殖型细胞向增殖型转化，说明消瘀化痰饮可使细胞DNA合成加快，增殖活跃，分裂能力增强，以恢复细胞的数量和功能，以达到减轻非酒精性脂肪肝大鼠的肝脏脂肪变性、恢复肝脏功能的作用。

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摘要

引言

第一部分消瘀化痰饮对非酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢和肝组织形态学的影响

前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

小结

参考文献

第二部分消瘀化痰饮对非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞凋亡及相关调控基因的影响

前言

材料与方法

结果

附表

讨论

小结

参考文献

结论

综述：非酒精性脂肪肝的中医药研究进展

致谢

个人简历