多效生长因子Pleiotrophin对Schlafen2基因表达的影响及其调控机制的研究

摘要

目的：在多效生长因子(Pleiotrophin，Ptn)基因稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞Ptn-siRNA B/MEF241中，研究Pleiotrophin对Schlafen2(Slfn2)基因表达的影响，以及在此调控过程中可能涉及的细胞因子；探讨Ptn沉默诱导Slfn2基因表达可能涉及的信号通路。 方法：前期研究发现，多效生长因子(Pleiotrophin，Ptn)基因稳定沉默的小鼠胚胎成纤维细胞Ptn-siRNA B/MEF241中Schlafen2(Slfn2)基因高表达。在本实验中，(1)为了验证Ptn是否可能通过调控某种分泌型因子来抑制Slfn2表达，用Ptn稳定沉默细胞的培养液培养对照NC细胞，通过Northern杂交法检测培养不同时间后NC细胞中Slfn2表达水平变化，同时应用RT-PCR检测Ptn沉默细胞内IL-1a和IL-1f6表达水平，以及外源性PTN因子(终浓度50ng/μl)对Ptn沉默细胞内IL-1表达水平的影响；分别使用重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(rhlL-1ra)和IL-1a中和抗体阻断IL-1的作用通路，检测Ptn稳定沉默细胞中Slfn2基因表达变化。 (2)为了探讨Ptn沉默诱导Slfn2基因表达可能涉及的信号通路，应用Western印迹检测Ptn沉默细胞及NC细胞JNK磷酸化基础水平，以及外源性PTN因子(终浓度50 ng/μl)对Ptn沉默细胞JNK磷酸化水平的影响；用SP600125和SB203580特异性阻断JNK和p38通路，Northern印迹分析Ptn沉默细胞Slfn2基因转录水平的变化。(3)为了进一步验验证Ptn沉默细胞内表达上调的IL-1是否也对JNK通路具有调控作用，分别使用重组人白细胞介素-1受体拮抗剂(rhIL-1ra)和IL-1a中和抗体阻断IL-1的作用通路，应用Western印迹检测Ptn稳定沉默细胞中JNK磷酸化水平的变化。 结果：(1)Ptn沉默细胞中Slfn2表达显著上调，Ptn沉默细胞培养液可以诱导对照细胞Slfn2表达；Ptn沉默后细胞内IL-1a和IL-1f6表达显著上调，外源性PTN能抑制沉默细胞中IL-1a和IL-1f6的表达； IL-1受体拮抗剂(rhIL-1ra)和IL-1a中和抗体可抑制Ptn沉默细胞中Slfn2表达。 (2)Ptn沉默诱导细胞内磷酸化JNK蛋白高表达，此诱导效应可被外源性PTN抑制；阻断JNK通路呈时间依赖性抑制Ptn沉默细胞中Slfn2基因表达；阻断p38通路对Ptn沉默细胞中Slfn2表达水平没有明显影响。 (3)IL-1受体拮抗剂(rhIL-1ra)和IL-1a中和抗体可抑制Ptn沉默细胞中JNK磷酸化水平。 结论：(1)Ptn对Slfn2基因表达具有负性调控作用，在此调控过程中IL-1家族是其中一种非常重要的调控因子。 (2)Ptn可能通过抑制其下游JNK/MAPK通路来负调控Slfn2的表达。 (3)Ptn沉默细胞内表达上调的IL-1也对JNK/MAPK通路具有调控作用

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肿瘤分子靶向治疗进展（综述）

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