重楼配伍姜黄抗肿瘤增效减毒机制研究

摘要

重楼皂苷（Rhizoma Paridis saponins，RPS）在现代临床上对各种癌症有很好的治疗作用。姜黄素在食品上广泛应用于香料和着色剂有很好抗癌药理活性。已经有研究表明重楼皂苷会引起肝和肺损伤而姜黄素仅引起了轻微的肝损伤。但是，他们的毒性机制并不清楚。因此为了解释这一现象，本实验对氧化应激，促炎症因子和解毒酶进行检测。结果表明，重楼皂苷产生了过量的活性氧簇和促炎症因子，降低了抗氧化酶和解毒酶对机体造成损伤，然而作为自我保护重楼皂苷激活了Nrf2和上调了HO-1酶减少了对机体的损伤。大剂量的姜黄素引起了轻微的氧化应激和炎症反应，并且也激活了Nrf2和上调了HO-1的表达。在停药30天后，这些在肝部和肺部的不正常现象消失。本文工作为更深的研究减少有毒草药应用的危险性提供依据。并且阐述了间歇性的用药的重要性。
　　本实验室前期的研究结果表明，RPS会引起肝损伤。然而在与小剂量姜黄素配伍后会减轻毒性作用。为了解释这种结果，同样进行了氧化应激，促炎症因子和解毒酶进行检测。发现加入小剂量的姜黄素后缓解了RPS引起的ROS和8-OHdG的升高，Trx和TXNIP分离，减轻了炎症因子的上调以及增强Nrf2和HO-1的解毒作用。本实验的工作为更深的研究重楼皂苷和姜黄素配伍提供了有力依据。
　　基于前期对重楼皂苷的研究，RPS不仅抑制了H22肝癌小鼠的肝肿瘤生长和裸鼠异种移植的人肝癌，而且还有效的减弱了在DEN诱导的肝癌引起的肺腺瘤。然而，他们这些治疗机制并不清楚。本实验应用WB和RT-PCR技术对RPS抗肝毒性和肺转移的机制进行检测。结果表明，RPS降低了8-OHdG从而降低了肝损伤，使Ⅰ相代谢酶上调，并且增加了Ⅱ相代谢酶的表达。重楼皂苷有效的减轻了肺腺癌的转移通过下调MMP9和上调TIMP2。总之，重楼皂苷是一个潜在的抗癌制剂。
　　研究表明，重楼皂苷和姜黄素以及楼黄配伍对肺腺癌细胞有很好的治疗作用，因此我们的实验用化学物质DEN诱导小鼠肺癌，研究药物对癌症的抑制作用及作用机制。结果表明重楼皂苷，姜黄素以及两者配伍对DEN诱导的肺癌有一定的抑制作用。重楼皂苷和姜黄以及楼黄配伍抑制肺癌上游靶点EGFR、Her2、ALK、TGF以及Ras-ERK和PI3K-pAkt信号通路，并且通过抑制增值，炎症和细胞异形畸变，促进分化、凋亡等方面对肿瘤细胞进行抑制的。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 癌症研究进展

1．1．1 肝癌及肺转移的研究进展

1．1．2 肺癌及分子靶点研究进展

1．2 毒性损伤机制研究进展

1．2．1 氧化应激损伤

1．2．2 炎症损伤

1．2．3 Nrf2抗氧化抗炎机制

1．3 楼黄配伍研究进展

1．3．1 重楼抗肿瘤研究进展及其毒性作用

1．3．2 楼黄配伍成药性

1．3．3 楼黄配伍降低毒性作用

1．4 本文的研究目的与意义

1．5 本文研究的内容

2 材料与方法

2．1 药材

2．2 主要试剂

2．3 实验仪器

2．4 相关溶液配制

2．4．1 琼脂糖凝胶电泳相关溶液

2．4．2 Western Blot相关溶液

2．5 实验方法

2．5．1 动物模型建立

2．5．2 样本取材

2．5．3 氧化应激检测

2．5．4 活性氧释放试验

2．5．5 组织病理学检测

2．5．6 免疫组化分析

2．5．7 Western Blot表达分析

2．5．8 RT-PCR基因表达分析

2．5．9 酶联免疫分析(ELISA)实验

2．5．10 统计学分析

3 结果与讨论

3．1 重楼皂苷对正常大鼠毒性机制研究

3．1．1 DNA氧化应激结果分析

3．1．2 重楼皂苷对正常大鼠肝脏II相解毒酶的影响

3．1．3 重楼皂苷对NF-κB、炎症信号通路的影响

3．1．4 讨论

3．1．5 小结

3．2 姜黄素对正常大鼠毒性机制研究

3．2．1 氧化应激损伤分析

3．2．2 姜黄素对II相解毒酶的影响

3．2．3 姜黄素对炎症因子物质的影响

3．2．4 讨论

3．2．5 小结

3．3 楼黄配伍减毒作用机制研究

3．3．1 氧化应激结果分析

3．3．2 楼黄配伍对Nrf2，HO-1的影响

3．3．3 楼黄配伍对促炎症因子表达的影响

3．3．4 讨论

3．3．5 小结

3．4 重楼皂苷对DEN诱导大鼠肝癌及肺转移作用机制研究

3．4．1 DNA氧化应激结果分析

3．4．2 重楼皂苷对DEN大鼠肝脏I相II相代谢酶mRNA分析

3．4．3 重楼皂苷对肺转移作用机制研究

3．4．4 讨论

3．4．5 小结

3．5 姜黄素和重楼皂苷对DEN诱导的小鼠肺癌治疗机制研究

3．5．1 病理切片结果分析

3．5．2 氧化应激指标分析

3．5．3 上游分子靶点分析

3．5．4 信号传导通路分析

3．5．5 核转录因子分析

3．5．6 药物对细胞的增殖，凋亡和分化结果分析

3．5．7 炎症结果分析

3．5．8 细胞角蛋白分析

3．5．9 讨论

3．5．10 小结

4 结论

5 展望

参考文献

7 攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢