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论文说明:缩略语
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第一章 综述
1 SHP-2酪氨酸磷酸酶研究进展
1.1 SHP-2的分子结构
1.2 SHP-2功能特点
1.3 SHP-2的生物学作用
1.4 SHP-2突变与疾病的关系及相关机制
2 SH2结构域研究进展
2.1 SH2结构域的结构
2.2 SH2配体识别机制
2.3 SH2结构域所介导的生物学作用
3 C-SH2结构域研究进展
3.1 C-SH2结构测定
3.2 C-SH2结构域作用
4 核磁共振波谱技术在结构生物学中作用
4.1 用核磁技术研究大蛋白或复合物
4.2 研究动态的生物大分子之间及蛋白质与核酸/配基的相互作用
4.3 蛋白质的动力学
4.4 用固体核磁共振与液体核磁共振技术研究膜蛋白的结构与功能
4.5 蛋白质折叠
5 展望
6 研究目的和内容
6.1 研究目的
6.2 研究内容
第二章 生物信息学分析
1 序列与工具
1.1 序列
1.2 工具和软件
2 方法
3 结果
3.1 C-SH2的信息
3.2 蛋白序列多重比对
3.3 空间构象
4 讨论
第三章 C-SH2基因的克隆
1 材料与试剂
1.1 材料
1.2 试剂
2 方法
2.1 重组表达质粒的构建策略
2.2 质粒提取
2.3 PCR扩增
2.4 PCR产物与pGEX-2T载体的双酶切
2.5 连接反应
2.6 连接产物的转化
2.7 重组克隆的筛选与鉴定
2.8 序列测定
3 结果
3.1 PCR扩增目的片段C-SH2
3.2 重组克隆的鉴定
3.3 序列测定
4 讨论
第四章 重组蛋白在LB培养基中的表达、纯化
1 材料与试剂
1.1 材料与设备
1.2 试剂
2 方法
2.1 重组质粒在LB培养基中表达
2.2 SDS-PAGE电泳分析
2.3 GST亲和层析柱纯化重组蛋白
2.4 Sephadex 75 HP(10/50)分子筛柱子进一步纯化
3 结果
3.1 重组蛋白在LB培养基的诱导表达形式
3.2 重组蛋白的亲和层析柱纯化
3.3 重组蛋白的FPLC分子筛柱子进一步纯化
3.4 重组蛋白在LB培养基中的表达量和产率
4 讨论
第五章 分子质量测定和Western blotting
1 材料与试剂
1.1 材料和仪器
1.2 试剂
2 方法
2.1 质谱仪测定分子质量
2.2 总蛋白质的抽提
2.3 Western blot
3 结果
3.1 重组蛋白分子量测定
3.2 免疫印迹结果
4 讨论
第六章 重组蛋白在M9培养基中表达纯化和NMR初步分析
1 试剂与材料
1.1 材料与设备
1.2 试剂
2 方法
2.1 重组质粒在LB培养基中表达纯化
2.2 蛋白超滤浓缩
2.3 Bradford法定量
2.4 NMR初步分析
3 结果
3.1 重组蛋白在M9培养基的诱导表达
3.2 重组蛋白在M9培养基中的表达量和产率
3.3 NMR蛋白样品参数
3.4 NMR初步分析
4 讨论
结论
参考文献
致谢
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