致泻性大肠埃希菌流行状况及耐药性研究

摘要

目的:对杭州地区不同来源的致泻性大肠埃希菌(DiarrheagenicEscherichia coli, DEC)的流行分布状况、毒力基因、耐药性及耐药基因进行研究。
　　方法:收集人、动物和水环境分离的大肠埃希菌（Escherichia coli，E.coli）共790株。采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行菌株鉴定;多重聚合酶链反应(multiplex Polymerase Chain Reaction，mPCR)扩增毒力基因(bfpB、escV、astA、stx1、stx2、pic、elt、 estIb、estIa、invE和aggR)，筛选致泻性大肠埃希菌;纸片扩散法和全自动细菌鉴定仪和药敏系统进行药敏试验;PCR检测耐药菌株的耐药基因;多位点序列分析、系统发育分型和脉冲场凝胶电泳进行分子分型及其同源性分析。
　　结果:790株E.coli（急腹症患者269株、住院患者66株、儿童患者103株、健康体检者106株、农场猪68株、宠物狗85株和水环境93株）中分离到19株肠致病性大肠埃希菌(Enteropathogenic E.coli，EPEC)、11株肠产毒素性大肠埃希菌(Enterotoxigenic E.coli，ETEC)、85株肠粘附性大肠埃希菌(Enteroaggregative E.coli，EAEC)，分离率分别为2.4％、1.4％、10.8％，未分离到肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagic E.coli，EHEC)和肠侵袭性大肠埃希菌(Enteroinvasive E.coli，EIEC)。EAEC、EPEC和ETEC菌株对头孢菌素类抗生素耐药率均高于18％，喹喏酮类抗生素耐药率均高于9％，EAEC菌株中对亚胺培南的耐药率为2.4％。耐药基因检测结果显示，19株EPEC菌株中，1株携带blaCTX-M-123基因，2株携带blaCTX-M-14基因，对喹诺酮类耐药的2株菌株中，1株菌株同时携带qnrS1、oqxAB和qepA耐药基因，另一株有aac(6')-Ib-Cr基因;11株ETEC菌株携带blaCTX-M-55和blaCTX-M-14基因各1株，其中有1株菌株携带喹诺酮耐药基因qnrS1;85株EAEC中有25株携带bla CTX-M-14基因，19株携带blaTEM基因，15株菌株含有质粒介导的喹诺酮耐药基因oqxAB,其中2株菌株同时携带qnrS2、oqxAB和aac(6')-Ib-cr基因，同时，分离到的2株EAEC菌株携带blaKPC-2基因。
　　EPEC毒力基因结果显示bfpB检出率为5.3％(1/19)，escV为100％(19/19)。ETEC菌株中，elt检出率为45.5％(5/11)基因，estIb基因为54.5％(6/11)，未检测到estIa基因。EAEC菌株中，astA最为常见，占89.4％(76/85)。MLST和系统发育分型结果显示，EPEC菌株中，ST10-A为最常见的型别，在人和宠物中均检测到;ETEC中，CC10-A型最为常见，占到36.4％; EAEC中，发现57个不同的ST型，其中，CC10和ST38为最多，占到22.4％(19/85)，A和D型占72.9％(62/85)。在EPEC和ETEC菌株中，PFGE结果显示菌株间无同源性，EAEC中，不同来源的住院患者和儿童门诊分离样本中各有2株细菌具有同源性，为同一克隆株。
　　结论:1.在杭州地区流行的致泻性大肠埃希菌主要为EAEC、EPEC和ETEC，其中EAEC是检出最多的肠道致泻性大肠埃希菌，分布在人、动物和环境中，CC10和ST38型是检出最多的型别，EPEC和ETEC菌株主要分布在急腹症患者中，其中非典型EPEC是EPEC中分离最多的菌株，为94.7％，ST10型是最常见的型别。
　　2、致泻性大肠埃希菌对临床常用抗生素有一定的耐药性。国内首次发现对碳青霉烯类抗生素耐药的产blaKPC-2的EAEC菌株;国内首次发现携带4种喹诺酮耐药基因qnrS1、oqxA、oqxB和qepA的EPEC菌株。
　　3.astA是EAEC中最常见的毒力基因，elt和estIb是ETEC最常见的毒力基因，escV在EPEC中检出最多。

目录

声明

摘要

第一章：绪论

1．1 致泻性大肠埃希菌流行现状

1．2 致泻性大肠埃希菌检测方法研究进展

1．3 致泻性大肠埃希菌耐药性及耐药基因研究进展

第二章：致泻性大肠埃希菌流行状况研究

2．1 前言

2．2 材料方法

2．2．1 材料

2．2．2 方法

2．3 结果

2．3．1 菌株收集情况

2．3．2 MLST和系统发育分型结果

2．3．3 PFGE结果

2．4 讨论

第三章：致泻性大肠埃希菌耐药性研究

3．1 前言

3．2 材料方法

3．2．1 材料

3．2．2 方法

3．3 结果

3．3．1 药物敏感性试验结果

3．3．2 耐药基因检测及质粒接合和转化结果

3．4 讨论

参考文献

附录

致谢

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