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棉花基因转化的研究及其在纤维品质改良中的应用

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第一章文献综述

1棉花外源基因转化的方法

1.1根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导法

1.2基因枪法

1.3农杆菌法和基因枪法结合的转化方法(简称农杆枪法:Agrolistic)

1.4花粉管通道法

1.5其它途径

2棉花基因转化受体培养体系的研究

2.1棉花愈伤和胚状体的培养及其作为基因转化受体的研究

2.2棉花茎尖和腋芽的培养及其作为转化受体的研究

2.3花粉作为基因转化受体的研究

3棉花遗传转化的主要成就

3.1转基因抗虫棉

3.2转基因抗除草剂棉

3.3转基因抗病棉

3.4转基因抗盐棉

3.5转基因杂种棉

3.6转基因抗逆棉

4棉花纤维品质的转基因育种现状

4.1棉纤维发育基因的克隆

4.2外源纤维基因的导入与棉纤维品质的改良

5转基因棉花的安全性评价

5.1转基因棉花安全性评价己积累的有关经验和数据

5.2国外转基因棉花的安全性评价

5.3我国转基因棉花的安全性评价

6存在问题及展望

第二章棉花基因转化受体的组织培养体系

1材料与方法

1.1材料

1.2培养基的配制

1.3无菌苗及外植体的准备

1.4试管苗的壮苗、生根和移栽

2结果与分析

2.1棉花愈伤和胚状体再生成苗

2.2茎尖分生组织再生成苗

2.3分化绿苗的生根和移栽

3讨论

3.1棉花愈伤组织、胚状体再生成苗

3.2茎尖分生组织再生成苗

4小结

第三章基于组织培养的纤维素合成酶基因的转化

1材料与方法

1.1供试材料

1.2培养基的配制

1.3农杆菌菌株及感染

1.4共培养

1.5抗生素处理

1.6愈伤组织的诱导、继代及胚胎发生

1.7转基因试管苗的二次筛选和生根培养

2结果与分析

2.1农杆菌介导的棉花愈伤和胚状体的基因转化

2.2农杆菌介导的棉花分生组织基因转化

2.3转基因试管苗的生根和再筛选

3讨论

3.1农杆菌介导的棉花愈伤、胚状体成苗基因转化

3.2农杆菌介导的棉花茎尖分生组织成苗基因转化

3.3农杆菌介导的棉花基因转化中抗生素的筛选

4小结

4.1农杆菌介导的棉花愈伤再生植株基因转化

4.2农杆菌介导的棉花分生组织再生植株基因转化

第四章纤维素合成酶基因的原位转化

1材料与方法

1.1供体材料与受体材料

1.2供体材料的获得

1.3花粉生活力和花粉管在花柱中的生长

1.4基因转化的方法

1.5保铃剂的施用

1.6原位基因转化法获得的转化体的筛选

2结果与分析

2.1花粉管通道法

2.2农杆菌真空渗透花粉授粉法

2.3原位基因转化法转化体的筛选

3讨论

3.1花粉管通道法

3.2农杆菌真空渗透花粉授粉法

3.3原位基因转化体的筛选

3.4原位转化法的应用前景

4小结

4.1花粉管通道法技术的研究

第五章转基因棉花的分子检测和GUS报告基因的检测

1材料与方法

1.1材料

1.2方法

2结果与分析

2.1 PCR检测

2.2转化体的PCR-Southern、Southern杂交检测

2.3转化体GUS报告基因的检测

3讨论

3.1 PCR反应

3.2 Southern杂交

3.3转化体的GUS报告基因检测

4小结

4.1 PCR检测

4.2 PCR-Southern、Southern杂交

4.3 GUS报告基因的检测

第六章转基因棉花的遗传与生物学表达特性的分析

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果与分析

2.1转基因棉花的遗传特性

2.2转基因棉花当代及后代植株农艺性状的调查

2.3转基因棉花当代纤维品质及相关农艺性状的测定

2.4转基因棉花纤维品质与农艺性状的相关性分析

3讨论

3.1转基因棉花的遗传特性

3.2转基因棉花的生物学表达特性

4小结

4.1转基因棉花的遗传与分离

4.2转基因棉花的生物学表达特性

参考文献

附图

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摘要

该研究以棕色棉细胞质雄性不育系的恢复系G-007为基因转化受体,以从木质醋杆菌中克隆的acsA、acsB、acsC和acsD4个纤维素合成酶基因(可能具有改良棉纤维品质的功能)为转化目的基因,以农杆菌介导法和花粉管通道法为主要转化手段,分别将含有单个、两个、多个目的基因的植物表达载体导入棉花中;经潮霉素筛选、GUS报告基因的活性检测、PCR检测、Southern杂交以及对转基因后代的遗传学分析,筛选出4个纤维品质有明显改良的转基因单株.通过比较不同的转化方法,初步建立了一套棉花基因转化的技术体系.

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