天南星科植物病毒研究Ⅰ：天南星科植物病毒的分子检测Ⅱ：2种天南星科作物的脱毒培养

摘要

该研究论文对中国浙江省、湖南省和海南省等地的天南星科植物上的主要病毒进行了检测和分子鉴定,比较了该科主要病原病病毒芋花叶病毒（DsMV）不同分离物的序列同源性并分析其种内分化关系;同时,我们对2种重要的芋属栽培作物--奉化芋艿头、乌梗芋（Colocasia esculenta）和中国特有的天南星科药用植物--掌叶半夏（Pinellia cordata）进行了脱毒培养和快速繁殖研究.

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摘要

ABSTRACT

第一章文献综述

第一部分：天南星科植物病毒的研究进展

1.1天南星科植物的起源与分布

1.2天南星科植物病毒的研究进展

1.3芋花叶病毒的生物学特征

1.4 2种天南星科作物芋和半夏

第二部分：植物脱毒组培的研究进展

1.5病毒侵染对无性繁殖作物的危害

1.6脱毒苗获得的方法学

1.7植物病毒检测的方法学及其进展

1.8拟研究内容和目标

第二章天南星科植物病毒的多样性研究

2.1材料与方法

2.1.1毒源采集与保存

2.1.2病毒双链RNA提取与病毒基因组分分析

2.1.3病毒提纯

2.1.4病毒形态学与组织病变观察

2.1.5 DNA模板的制备

2.1.6植物总RNA的提取

2.1.7 RNA样品的变性和点样

2.1.8杂交反应

2.1.9脱探针和二次杂交

2.2结果与分析

2.2.1天南星科植物病毒的杂交检测结果

2.2.2侵染天南星科植物的主要病毒及分布规律

2.3小结与讨论

第三章芋花叶病毒3’-末端序列的分子克隆和差异分析

3.1材料和方法

3.1.1病毒分离物

3.1.2酶与试剂

3.1.3引物设计

3.1.4病毒RNA模板的制备

3.1.5 RT-PCR和cDNA合成

3.1.6 PCR反应和目标片段的扩增

3.1.7 PCR产物回收

3.1.8 DNA片段的连接

3.1.9感受态细胞的制备

3.1.10重组质粒的转化

3.1.11重组质粒DNA的制备(碱裂解法)

3.1.12重组质粒的鉴定

3.1.13 DNA测序和序列同源性比较

3.2结果分析

3.2.1 DsMV3’-末端序列的cDNA的克隆

3.2.2不同DsMV分离物的序列分析

3.2.3不同DsMV分离物CP核苷酸序列同源性比较

3.2.4不同DsMV分离物CP氨基酸序列同源性比较

3.2.5不同DsMV分离物3'-UTR核苷酸序列同源性比较

3.3小结与讨论

第四章芋和掌叶半夏的脱毒培养研究

4.1材料与方法

4.1.1芋的组织培养

4.1.2掌叶半夏的组织培养

4.1.3 TA对芋再生苗生长的影响

4.1.4芋再生苗病毒检测

4.2结果与分析

4.2.1芋组培苗的获得

4.2.2掌叶半夏组培苗的获得

4.2.3 TA处理对芋再生苗生长的影响

4.2.4点杂交方法检测DsMV灵敏度的测定

4.2.5乌梗芋脱毒苗的获得

4.2.6奉化芋艿头脱毒苗的获得

4.3小结与讨论

附件1：溶液的配制

附件2：研钵和RNA提取器械的处理

附件3：MS培养基母液的配制

参考文献