p53-p21/p27通路调节人核糖核苷酸还原酶和吉西他滨抗癌耐药机制的研究

摘要

癌症是严重威胁人类生命的常见病和多发病.由于核糖核苷酸还原酶(Ribonucleotidereductase,RR)是催化核苷经脱氧还原为脱氧核苷(dNTP)的专一酶类,而dNTP为DNA损伤修复及复制所需的重要原料,因而RR成为癌症治疗的重要靶点之一,阐明该酶的功能及其调节机制将对肿瘤的发生和防治等研究领域产生重要的影响.一.对UV照射的应答上,野生型p53通过与p53R2和hRRM2进行蛋白-蛋白间的交互作用调节人核糖核苷酸还原酶大小亚基形成RR全酶,RR全酶的组装在细胞核内进行.1.细胞在静息状态下,野生型p53与p53R2和hRRM2结合,但不能与hRRM1结合.UV照射下可诱导p53R2和hRRM2从p53复合体中游离出来并结合到hRRM1上.2.细胞中的P53和RR小亚基p53R2与hRRM2可能存在于相同的空间位置.3.hRRM1,p53R2和hRRM2蛋白在UV照射后从胞浆往胞核内移动,RR亚单位核积聚多寡的动力学过程和RR活性高低变化呈高度一致.4.突变的p53影响p53R2和hRRM2从p53转移到hRRM1的能力.5.HRRM2过度表达一定程度地影响了p53和hRRM2亚单位的结合与分离.二.在细胞周期G1和S期,细胞浆p21和p27通过与RR亚单位的交互作用下调人RR应对UV损伤1.应答UV照射时,p21/p27与细胞浆的RR亚基进行交互作用;p21/p27与RR功能间相互抑制.2.UV照射使p21和p27与细胞浆的RR各亚基结合大大增加,这种结合效应S期甚于G1期.3.细胞核内RR活性的改变与UV介导的p21/p27与RR亚基在细胞浆中的结合效应呈负相关.三.组蛋白去乙酰基酶水平下降可激活NF-Y结合hRRM2近端启动子上CCAAT,后者上调m2基因转录,该过程是调节Gem耐药的重要机制.1.与KB细胞比较,KBGem细胞hRRM2的启动子活性通过启动子上依序排列的CCAAT匣上调.2.来自KB和KBGem细胞的核提取物均与hRRM2的CCAAT基序结合,但具不同的结合模式,NF-Y亚单位A和B参与形成DNA-转录因子复合物.3.HDAC参与KBGem细胞NF-Y的转录抑制.HDAC抑制剂TSA可诱导KB细胞hRRM2蛋白水平和dCTP量增加,以及减少[<'3>H]标记吉西他滨掺入DNA的数量.基因微阵分析表明,绝大多数的组蛋白乙酰转移酶成员基因表达上调,而大多数的组蛋白去乙酰酶成员基因表达下调.

目录

缩略词表(Abbreviations)

前言

第一部分：野生型p53通过与p53R2和hRRM2进行蛋白-蛋白间的交互作用调节人核糖核苷酸还原酶的功能

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分：细胞浆p21和p27通过与RR亚单位的交互作用下调人核糖核苷酸还原酶

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分：人核糖核苷酸还原酶亚单位hRRM2介导吉西他滨抗癌耐药的机制

材料与方法

结果

讨论

参考文献

结论

综述 人核糖核苷酸还原酶及其抑制剂耐药机制的研究进展

一、人RR的结构功能

二、RR新家族成员p53R2的发展及其功能研究进展

二、RR活性的调节

四、问题与展望

参考文献

酪醇诱导肝癌细胞NQO1酶基因表达增加及细胞增殖的抑制

抗氧化和低氧诱导醌氧化还原酶1表达及调控

在读期间发表论文和课题申请情况

致谢