阴沟肠杆菌B8拮抗相关基因簇的克隆及功能验证

摘要

阴沟肠杆菌B8是从水稻叶面分离获得的一株广谱拮抗菌,最初分离筛选时以白叶枯病菌作为指示菌,发现它对白叶枯病菌具有很强的拮抗活性,网室及田间定殖和抗白叶枯病试验也取得了较满意的结果.进一步发现它对水稻和蔬菜等的多种病原有良好的拮抗效果,还对人和动物的葡萄球菌等细菌也具有良好的抑制作用,因此它是一株具有良好生物防治潜力拮抗细菌.本研究从基因水平对B8菌株拮抗分子机理进行了研究,为该菌株更好地应用于生物防治提供理论基础.

目录

文摘

英文文摘

资助项目

致谢

第一章文献综述

1抗微生物的筛选及生物防治

1.1木霉属真菌

1.2芽孢杆菌属

1.3假单胞菌属

1.4阴沟肠杆菌

2细菌拮抗物质及其基因的研究

2.1 Andrimid

2.2P.agglomerans产生的其它拮抗物质

2.3芽孢杆菌属细菌产生的拮抗物质

2.4假单孢菌属产生的拮抗物质

3基于PCR技术研究未知基因—染色体步行(Chromosome Walking)

3.1反向PCR(IPCR)

3.2随机引物PCR(RP-PCR)

3.3连接介导PCR(LM-PCR)

3.3染色体步行小结

4本研究的工作基础、目的、意义和主要内容

4.1本研究的工作基础

4.2本研究的目的、意义和主要内容

第二章阴沟肠杆菌拮抗活性相关片段的克隆与分析

1材料

2方法

3结果

3.1质粒pTLF的F片段测序

3.2质粒pTLB的B片段测序

3.3 F片段外围序列的染色体步行

3.4 B片段染色体步行

3.5F contig序列的拼接及同源性比较分析

3.6 B contig序列的拼接及同源性比较分析

3.7 Tn5插入破坏的anrF基因和AnrB片段的PCR扩增验证

4讨论

第三章阴沟肠杆菌B8拮抗相关基因簇的克隆

1材料

2方法

3结果

3.1 12.5kb片段的PCR扩增及PCR产物的酶切

3.2 12.5kb片段的分段克隆和测序

3.3 B8拮抗基因簇3’端的克隆和测序

3.4‘admO’和‘admT’基因之间8.3kb片段的PCR扩增

3.5 B8拮抗相关基因簇与adrimid生物合成基因簇部分基因的比较分析

4讨论

第四章阴沟肠杆菌B8拮抗活性相关基因的功能验证

1材料

2方法

3结果

3.1 B8、B8B和B8F菌株的药敏试验

3.2 Genr基因的扩增与克隆

3.3基因互补质粒pMD-FG的构建

3.4基因敲除质粒pMD-BG的构建及QCBG片段的扩增

3.5电击转化重组子的筛选和鉴定

3.6电击转化重组子的拮抗活性检测

4分析

本研究的主要结论和创新点

参考文献

攻读硕士学位期间发表和录用的论文