小鼠胚胎干细胞建系及人胚胎干细胞培养体系的建立初探

摘要

胚胎干细胞(embryonicstemcells，ESC)是从植入前的胚胎内细胞团(Innermasscells，ICM)或原始生殖细胞(Primordialgermcells，PGCs)分离和克隆的具有多潜能性细胞。胚胎干细胞的发现为研究细胞分化，动物和人发育机制，阐明基因功能，筛选药物，细胞治疗疑难杂症等开辟了广阔的空间。胚胎干细胞的建系工作，是任何干细胞研究的基础。优良的建系方法和稳定的培养体系，为后期各种实验铺垫了道路。本实验进行了大量的方法和技术上的探索，旨在建立小鼠和人胚胎干细胞系。 本文阐述了人胚胎干细胞建系的研究进展。其建系和维持过程中，胚胎材料来源、内细胞团分离、扩增传代、冻存复苏等均为难点。从鼠源饲养层、人源饲养层到无饲养层培养系统的发展，以及体细胞核移植技术平台的建立，奠定了治疗性克隆的基础。同时，从进一步阐述了胚胎干细胞保持自我更新的分子机制的研究进展，旨在从分子层面了解生长和分化的原因并进一步探索好的建系方法。胚胎干细胞通过特殊内源性分子的表达，以及微环境中多种细胞因子和胞外基质的刺激，构成信号网络，共同调控自我更新。近年来，通过对Oct3/4、Nanog等胚胎干细胞特殊分子标记，以及LIF-STAT3，Wnt-β-连环素，BMP-Id，bFGF等信号通路的研究，探讨了胚胎干细胞自我更新信号网络的分子机制。维持自我更新的关键在于胚胎干细胞生长微环境中的各种细胞因子和胞外基质的含量，以及细胞内源性特异分子表达量之间的平衡。最后，笔者就人胚胎的来源、胚胎干细胞的研究目的及世界各国对该项目的立场等所涉及的伦理学争论作一个概括，希望在规范的法律保护下，在全社会理性的支持下，在科研工作者的不懈努力下，胚胎干细胞能早日用于人类疾病的治疗，推动人类社会的进步。

目录

致 谢

缩略词表

文献综述 人胚胎干细胞建系培养，自我更新分子机制的研究进展以及伦理之争

1.人胚胎干细胞系的建立及维持

2.维持胚胎干细胞自我更新的分子机制

3.胚胎干细胞的伦理之争

4.展望

参考文献

实验部分--前言

实验部分第一部分：建立绿色荧光蛋白标记的小鼠胚胎干细胞系

1.材料和方法

2.结果

3.讨论

实验部分第二部分：建立129S1/SvImJ小鼠胚胎干细胞系

1.材料和方法

2.结果

3.讨论

实验部分第三部分：人胚胎干细胞系的培养体系的建立

1.材料和方法

2.结果

3.讨论

实验部分---参考文献

硕士期间发表论文

维持胚胎干细胞自我更新分子机制的研究进展

Establisment of Murine Embryonic Stem Cell Line Carrying Enhanced Green Fluorescence Protein and its Differentiation into Cardiomyocyte-like Cells in vitro

录用证明