极端超微细菌蛋白多糖对动物免疫功能调节的研究

摘要

多糖广泛存在于植物、动物和微生物细胞壁和细胞中，是构成生命的三大基本物质之一，也是具有免疫调节活性的生物大分子物质。 本项目研究了超微细菌Glaciecol apolaris蛋白多糖(PSK)的常规水浸提法中不同料液比、提取温度和时间对多糖得率、粘度和表面张力的影响：同时研究了超声提取对多糖得率、粘度和表面张力的影响。结果表明：提取时间对多糖的提取率存在显著的影响(p<0.05)，用水溶剂浸提细菌多糖，料水比1∶15，提取温度在100℃左右，提取4h-6h，可获得较高的多糖得率，最高的得率可达8.08％，同时提取液粘度和表面张力较低。超声提取能提高PSK的得率，缩短提取时间，降低提取液的粘度和表面张力，有利于降低多糖浓度极化对分离纯化过程的阻力，提高处理量。超声处理条件以选择10-15min、100W功率，提取4h为宜，最高的得率可达8.82％。 从体内抑制试验和体外培养巨噬细胞的杀瘤试验对多糖的抑瘤作用进行了研究。体内抑瘤试验采用灌胃方式，计算抑瘤率和生命延长率。体外试验将巨噬细胞与肿瘤细胞共培养，测定NO浓度与细胞毒效应。培养上清液中一氧化氮(NO)浓度采用NO试剂盒检测，细胞毒效应通过MTT比色法检测。用黄嘌呤氧化酶法测定服用鳖组织浆大鼠脑、肝、血中的超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果表明，超微细菌Glaciecola polaris的蛋白多糖和细菌菌体对机体肿瘤具有不同程度的抑制作用，且能有效地增强机体对肿瘤的抵抗性，延长生命期。从细胞毒效应来看，超微细菌Glaciecolapolaris的蛋白多糖和细菌菌体能明显促使M9的活化，从而激发NO合成显著增高，细胞毒效应增强，促进巨噬细胞对病毒感染细胞的杀伤作用，但这种促Mψ的细胞毒作用随蛋白多糖浓度的变化呈现一定的变化，高浓度(100uL)要好于低浓度(50uL)；从细菌菌体中提取的蛋白多糖要好于细菌菌体本身。另外，Glaciecola polaris的蛋白多糖还可显著地提高SOD的活性，而增强机体的免疫能力。 从PSK对受低密度脂蛋白(Ox-LDL)和叔丁基氢过氧化物(tbOOH)等氧化物胁迫的巨噬细胞抗氧化能力进行了体外研究。PSK可有效地保护巨噬细胞减轻氧化损伤，且巨噬细胞克隆刺激因子(M-CSF)也有相似的结果。经PSK处理或M-CSF处理的巨噬细胞的成活率极显著地高于未经处理的巨噬细胞(p<0.01)。经PSK处理的巨噬细胞培养基能显著地提高巨噬细胞克隆刺激因子的分泌(p<0.05)，并能显著地增加M-CSF的mRNA的表达(p<0.05)。由此推测，PSK能减轻Ox-IDL和tbOOH对巨噬细胞的氧化损伤的作用，是与促进巨噬细胞对M-CSF的表达，提高M-CSF的分泌量相关联。 以水质pH为应激源，探讨超微细菌Glaciecolapolaris的蛋白多糖对中华鳖免疫和抗应激能力的影响。结果表明，超微细菌Glaciecolapolaris的蛋白多糖对中华鳖幼鳖血细胞吞噬率、血清溶菌活力和杀菌活力有明显促进作用(p<0.01)，并对应激引起的皮质醇有抑制作用。由此可见，超微细菌Glaciecola polaris的蛋白多糖的添加不仅对酸应激所致的内分泌功能的紊乱有调整作用，而且对酸应激所致的免疫功能低下有保护作用。 研究了蛋白多糖对中华鳖生长性能及免疫功能的影响。选用平均体重50-60g的中华鳖幼鳖300只，随机分成10组，试验组在基础饲料中添加0.05％、0.1％的超微细菌Glaciecolapolaris的蛋白多糖，或添加0.1％、0.5％的超微细菌菌体粉碎物，对照组以0.5％α-淀粉代替。饲养8周，测定生产性能、免疫器官指数和血清抗氧化性能。结果表明，各试验组的生长比率、免疫器官指数和血清超氧化物歧化酶(SOD)活性，都显著与极显著地高于对照组(P<0.05-0.01)，并随添加量的增加而增加。饲料系数各试验组显著地低于对照组(P<0.05)。超微细菌和蛋白多糖的添加对血清溶菌酶活力的影响差异不显著(P>0.05)。建议超微细菌Glaciecolapolaris的蛋白多糖适宜添加量为0.05％。

目录

论文说明：缩略语、图表目录

本研究的创新性

摘要

1前言

2文献综述

2.1多糖的免疫调节功能研究进展

2.1.1多糖对免疫系统的作用

2.1.2抗氧化作用

2.1.3抗肿瘤作用

2.1.4抗病毒作用

2.1.5抗凝血作用

2.2中华鳖的免疫研究进展

2.2.1中华鳖的免疫系统

2.2.2中华鳖的免疫功能

2.2.3影响鳖免疫应答的主要因素

2.3结语

3研究与讨论

3.1超微细菌Glaciecola polaris多糖提取和超声强化方法的研究

3.1.1材料与方法

3.1.2结果

3.1.3讨论

3.1.4小结

3.2超微细菌Glaciecola polaris的蛋白多糖对鼠免疫功能影响

3.2.1材料与方法

3.2.2结果

3.2.3讨论

3.3超微细菌Glaciecola polaris的蛋白多糖对巨噬细胞抗氧化能力的影响

3.3.1材料与方法

3.3.2结果

3.3.3讨论

3.4超微细菌Glaciecola polaris的蛋白多糖对中华鳖抗酸应激能力的影响

3.4.1材料和方法

3.4.2结果

3.4.3讨论

3.5超微细菌Glaciecola polaris的蛋白多糖对中华鳖生长性能及免疫功能的影响

3.5.1材料与方法

3.5.2结果与分析

3.5.3讨论

4提示与展望

4.1提示

4.1展望

参考文献

附录