阿司匹林引起大鼠乙酸胃溃疡复发及其机制

摘要

1．研究背景 消化性溃疡的特点是易容复发，而且难于防止。临床观察表明，非甾体抗炎药(NSAIDs)是引起复发的重要因素，阿司匹林(Aspifin，Asp)是NSAIDs药的代表药。由于Asp的药理作用非常广泛，使得Asp成为全球范围内消耗量最多的药物之一。但Asp在治疗疾病的同时，产生了严重的副作用，即能引起胃炎、胃溃疡和溃疡复发等。 治疗消化性溃疡的关键在于防止复发，但消化性溃疡复发的机理还不清楚，因而很难防止复发。因此，阐明消化性溃疡复发的机理，将能有效地预防溃疡复发，指导临床合理应用NSAIDs。本论文采用乙酸溃疡模型，在溃疡愈合后用Asp诱导复发，通过检测关键细胞因子和生理生化指标并进行分析，探讨了Asp引起溃疡复发的作用和复发的机制，这对防止溃疡复发、彻底治愈溃疡具有重要意义。 2．材料与方法 2．1．模型复制：实验采用Wistar雄性大鼠，按文献报道的方法复制胃溃疡模型。 2．2．实验分组：实验分为两步，第一步是在溃疡制作后的第3、15、25天用乙醚麻醉处死部分大鼠，观察溃疡形态。第二步是在第25天观察溃疡形态后，将其余的大鼠随机分为禁食对照组、盐水对照组(灌胃法给予生理盐水)、阿司匹林组(灌胃法给予Asp)。在溃疡制作后的第55天，采集标本，进行分析。 2．3．溃疡形态观察：测量溃疡面积后，对溃疡进行大体和光镜下观察。 2. 4．溃疡愈合质量评价：光镜下测定扩张腺体数、再生黏膜厚度、黏膜下组织中的微血管和炎细胞数量。 2．5．胃黏膜PGE<,2> 胃酸分泌：测量胃液量和胃液的pH，ELISA方法测定PGE<,2>。 2．6．环加氧酶表达：RT-PCR检测胃黏膜COX-1(环加氧酶-1)、COX-2 mRNA的表达；Western blot方法检测胃黏膜COX-1、COX-2蛋白的表达。 2．7．胃黏液、胃黏膜血流(GMBF)和内皮素(ET)测定：按文献报道的方法测定胃黏液，氢气清除法测定GMBF，ELISA方法测定血浆中的ET含量。 2．8．生长因子：ELISA方法测定胃粘膜表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-α(TGF-α)和血清血管内皮生长因子(VEGF)。 2．9．炎症因子：ELISA方法测定血清中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和血浆中的白细胞介素-β(IL-1β)。 2．10．统计学分析：所得数据用均数±标准差表示，用SPSS 11.0统计分析软件进行分析。组间差异采用单因素方差分析中的LSD法。方差不齐时用秩和检验中的Mann-WhitneyU方法。P<0.05差异显著。 3．实验结果 3．1．Asp对溃疡形态的影响：溃疡制作后第25天，溃疡完全愈合。在阿司匹林组，在第45天，8只大鼠中的2只出现复发，在55天，8只中的5只出现复发。 3．2．Asp对溃疡愈合质量的影响：在溃疡制作后的第55天，在阿司匹林组，囊样扩张腺体和炎细胞数多于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)；再生黏膜厚度和微血管数低于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)。 3．3．Asp对PGE<,2>和胃酸分泌的影响：在溃疡制作后的第55天，在阿司匹林组，PGE<,2>少于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)；胃液量多于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)；胃液的pH低于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)。 3．4．Asp对环加氧酶表达的影响：在溃疡制作后第55天，COX-1 mRNA和蛋白的表达在3组间没有差异，与第15天的基本相同；在阿司匹林组，COX-2 mRNA和蛋白的表达多于禁食对照组和盐水对照组，与第15天的基本相同。 3．5．Asp对胃黏液、GMBF和ET的影响：在溃疡制作后的第55天，在阿司匹林组，胃黏液和GMBF少于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)；血浆ET高于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)。 3．6．Asp对生长因子的影响：在溃疡制作后的第55天，在阿司匹林组，胃黏膜EGF和TGF-α低于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)；血清中VEGF低于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)。 3．7．Asp对炎症因子的影响：在溃疡制作后的第55天，在阿司匹林组，血清中TNF-α和血浆中IL-1β高于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)。 4．讨论 在溃疡制作后的第25天溃疡全部愈合。第25天以后，给予大鼠Asp，发现在第55天，8只大鼠中的5只出现复发，具有统计学意义，表明用Asp诱导复发是成功的。 4．1．Asp对溃疡形态学的影响：在模型复制后的第3天，出现一个大而圆的溃疡，第25天，肉眼及镜下观察溃疡全部愈合。第5.5天，在阿司匹林组，肉眼及镜下观察在涂乙酸的部位出现了复发溃疡。这些结果表明，在愈合的溃疡部位，Asp引起了复发。 4．2．Asp对愈合质量的影响：在模型复制后的第55天，阿司匹林组的扩张腺体数、炎细胞数高于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)；再生黏膜的厚度、微血管数却低于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)，表明Asp能够降低溃疡的愈合质量。而阿司匹林组(8只中的3只)没有复发溃疡部位的黏膜结构与正常黏膜相似，表明愈合质量好的胃黏膜可以有效地抵抗Asp的损伤作用。这可以解释为什么复发在不同时间出现，并且多出现在原来的部位。 4．3．Asp对胃黏膜PGE<,2>和胃酸分泌的影响：PGE<,2>能够抑制胃酸分泌，调节胃粘液和碳酸氢盐的分泌、扩张血管、增加GMBF、促进胃粘膜上皮细胞更新、增殖。本研究显示，阿司匹林组的PGE<,2>含量低于禁食对照组和盐水对照组，表明Asp 能够抑制PGE<,2>的产生。胃酸过多可以损伤黏液一碳酸氢盐屏障和粘膜屏障。本研究还显示，阿司匹林组的胃液量高于禁食对照组和盐水对照组，而胃液的pH却低于禁食对照组和盐水对照组，表明Asp能够增加胃酸分泌，由此可知Asp抑制了PGE<,2>的产生，导致胃酸分泌增加。 4．4．Asp对COX表达的影响：COX是前列腺素合成的限速酶。本研究显示，COX-2的mRNA和蛋白在溃疡和复发时大量表达，PGE<,2>理应增多，但在本研究中显示PGE<,2>在阿司匹林组减少，因此，阿司匹林能够抑制COX的活性而不抑制其表达。 4．5．Asp对胃黏液、GMBF和ET的影响：胃黏液和HCO<,3><'->构成了黏液-碳酸氢盐屏障，是防御有害因子的第一道防线。GMBF可以为黏膜细胞提供氧和营养物质，维持黏液-碳酸氢盐屏障和粘膜屏障的功能。粘膜屏障是防御有害因子的第二道防线。ET具有强烈的缩血管作用。本研究显示阿司匹林组的胃黏液和GMBF都低于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)，而ET高于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)，表明Asp能够减少胃黏液和GMBF，增加ET。GMBF的减少可能是PGE<,2>减少和ET增加的结果。GMBF减少会导致胃粘膜缺血，引起粘液和碳酸氢盐减少，胃粘膜屏障功能减弱，溃疡复发。 4．6．Asp对生长因子的影响：EGF具有抑制胃酸分泌、促进胃黏膜上皮分化、增殖和增加GMBF的作用。本研究显示，阿司匹林组的EGF低于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)，因此，Asp引起胃黏膜EGF减少，导致了胃酸分泌增多、GMBF减少，愈合质量降低，进而导致复发。TGF-α在维持胃肠道粘膜更新和完整性方面有重要作用。本研究显示，阿司匹林组的TGF-α低于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)，因此，Asp引起胃黏膜TGF-α减少，降低了黏膜的更新能力，促进了复发。VEGF能够促进血管的形成。本研究显示，阿司匹林组的VEGF低于禁食对照组和盐水对照组(19<0.01)，因而血管生成减少，GMBF减少，促进了溃疡的复发。 4．7．Asp对炎症因子的影响：TNF-α和IL-1β是重要的致炎因子。本研究显示，阿司匹林组的TNF-α和IL-1β高于禁食对照组和盐水对照组(P<0.01)，表明Asp能够诱导TNF-α和IL-1β的增加，促进了炎症反应，导致了复发。 5．结论 Asp能够诱导溃疡复发，机制是：Asp抑制COX的活性，导致PGE<,2>生成减少，胃酸分泌增多，GMBF减少；GMBF减少，黏液生成减少，粘膜更新能力下降；ET增多，胃血管收缩，胃粘膜缺血；EGF和TGF-α减少，引起胃酸分泌增多，粘膜更新能力下降；VEGF减少，微血管生成减少，GMBF减少；TNF-α和IL-1β增多，诱导胃粘膜炎症反应，损伤胃粘膜。因此，Asp通过上述机制降低愈合质量，诱导溃疡复发。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：图表目录、缩略词

文献综述 胃粘膜损伤的部分机理与溃疡复发

第1章胃黏膜的防御功能

1.胃黏膜屏障的防御功能

2.生长因子

第2章非甾体抗炎药对胃黏膜的损伤作用

1.非甾体抗炎药概述

2.非甾体抗炎药直接损伤胃黏膜

3.阿司匹林抑制环加氧酶活性

4.阿司匹林减少胃黏膜血流

第3章炎症因子和内皮素对胃黏膜的损伤作用

1.肿瘤坏死因子-α对胃黏膜的损伤作用

2.白细胞介素-1β对胃黏膜的损伤作用

3.内皮素对胃黏膜的损伤作用

第4章溃疡愈合质量对溃疡复发的影响

1.愈合质量与溃疡复发

2.目前对愈合质量的评价方法

总结

参考文献

实验研究阿司匹林引起大鼠乙酸胃溃疡复发及其机制

第5章前言

第6章材料与方法

1.材料

2.方法

3.统计学分析

第7章实验结果

1.阿司匹林对大鼠乙酸胃溃疡形态学的影响

2.阿司匹林对溃疡愈合质量的影响

3.阿司匹林对胃黏膜PGE2和胃酸分泌的影响

4.阿司匹林对环加氧酶表达的影响

5.阿司匹林对胃黏液、黏膜血流和内皮素的影响

6.阿司匹林对生长因子的影响

7.阿司匹林对炎症因子的影响

第8章讨论

1.阿司匹林对大鼠乙酸胃溃疡形态学的影响

2.阿司匹林对愈合质量的影响

3.阿司匹林对胃黏膜前列腺素E2和胃酸分泌的影响

4.阿司匹林对环加氧酶表达的影响

5.阿司匹林对胃黏液、胃黏膜血流和内皮素的影响

6.阿司匹林对生长因子的影响

7.阿司匹林对炎症因子的影响

总结

参考文献

创新点

致谢(Acknowledgements)

附录(Appendix)