幽门螺杆菌对人胃上皮细胞动力学的影响及其作用机制探讨

摘要

背景:幽门螺杆菌(H.pylori)在人群中,尤其是亚洲人群中的感染率很高.H.pylori的感染与消化性溃疡、慢性萎缩性胃炎、胃粘膜相关淋巴样组织淋巴瘤及胃癌的发生密切相关.世界卫生组织(WHO)下属的国际癌症研究机构(IARC)将H.pylori定为胃癌的I类致癌原.但是H.pylori致病的确切机制仍不清楚,需要从细菌、宿主和环境因素共同探讨. H.pylori感染胃上皮细胞,无论是在体标本还是细胞系,都会改变其细胞动力学,但改变的模式不同.而细胞动力学的改变会破坏胃上皮细胞增殖与凋亡的平衡,与萎缩性胃炎、肠化、胃癌的发生密切相关.研究H.pylori对胃上皮细胞株细胞动力学的影响及其机制能够对H.pylori与宿主细胞的相互作用进行深入的探讨,为明确H.pylori的致病机制提供更多的证据. 近年的研究显示H.pylori感染会抑制细胞热休克蛋白70(heat shockprotein,lIsp70)的表达,而HSP70是重要的分子伴侣,具有对抗凋亡,促进增殖的作用,与细胞的增殖、细胞周期及凋亡等密切相关.我们假设H.pylori有可能通过调节细胞HSP70及相关蛋白如P21,PCNA等的表达而对宿主细胞生长动力学产生影响,因此我们将通过以下三个步骤的研究,试图弄清楚H.pylori的致病机川. 一、H.pylori对AGS细胞动力学影响的观察 目的:在体外观察H.pylori感染对人AGS胃上皮细胞株的生长情况、细胞活力和细胞周期的影响. 方法:不同浓度比例的H.pylori与AGS细胞共培养,在不同时间点观察不同浓度H.pylori作用下AGS细胞的形态、生长情况,检测细胞活力(MTT法).流式细胞仪检测H.pylori对AGS细胞周期的影响;以不加H.pylori的AGS为空白对照组. 结果:与空白对照组相比,H.pylori作用的各组AGS细胞在共培养24h后细胞发生明显的脱壁现象.贴壁细胞周边及培养液中可见较多菌体,及细胞崩解后的残留颗粒;并且这些表现随着H.pylori浓度的增高和作用时间的延长而明显.4h后及8h后,与H.pylori共培养的各组AGS细胞活力均较对照组增加,其中4h后,细菌/细胞500:1组较空白对照组有显著性差异(p<0.05);8h后, 200:1及100:1组较对照组也有显著性差异(p<0.05;p<0.01).而24h后,不同浓度H.pyIori作用下各组AGS的细胞活力均较对照组下降,尤其是200:1组(p<0.01)和500:1组(p<0.001).48h后,H.pylori作用下各组AGS的细胞活力较对照组下降更为显著(p均<0.001),并且细菌浓度越高,细胞活力下降越明显.与对照组相比,AGS细胞在H.pylori作用6h,12h及24h后G2和/或M期细胞的比例均明显改变. 结论:H.pylori在体外与AGS细胞共培养可改变AGS的细胞动力学,作用早期短暂促细胞增殖;24h后可使AGS细胞发生G2和/或M期阻滞而显著抑制细胞增殖,这一作用与细菌浓度及作用时间有关. 二、H.pylori对AOS细胞HSP70表达的影响 目的:体外观察H.pylori感染对AGS细胞HSP70表达的影响. 方法:AGS细胞与H.pylori共培养48h并作空白对照,Western blot检测细胞内HSP70的含量. 结果:与空白对照组相比,H.pylori作用后AGS细胞HSP70表达明显下降. 结论:H.pylori可减少AGS细胞HSP70的表达. 三、H.pylori对HSP70表达抑制的AGS细胞动力学及P21、PCNA表达的影响 目的;探讨H.pylori诱导AGS细胞动力学改变的机制是否与HSP70抑制及P21,PCNA表达改变有关. 方法:利用前期建立并鉴定完成的HSP70siRNA稳定转染AGS细胞株及其空载体转染AGS对照株将AGS细胞分成HSP70抑制组和非抑制组,观察两组细胞在ll.pylo

目录

引言

一、H.pylori对AGS细胞动力学影响的观察

二、H.pylori对AGS细胞HSP70表达的影响

三、H.pylori对HSP70表达抑制的AGS细胞动力学及P21、PCNA表达的影响

结论

参考文献

综述 幽门螺杆菌感染与胃癌

致谢