中华蜜蜂（Apis cerana cerana）主要王浆蛋白（MRJPs）基因及其表达

摘要

长期以来蜜蜂被视为一个很好的研究对象，深受广大昆虫研究者的青睐。中华蜜蜂(Apis cerana cerana)为东方蜜蜂的东亚类型中重要的亚种之一，长期适应于我国的地理特征和气候条件，具有其它蜂种不可替代的资源优势和研究价值。 蜂王浆中的主要王浆蛋白(Major Royal Jelly Proteins，MRJPs)是王浆蛋白中的水溶性部分(Water Soluble Proteins,WSPs)，占总蛋白含量的46％-89％，为主要成分。研究表明，MRJPs是由同源性很高的一系列蛋白组成的蛋白家族，这一家族共有九个成员。大量实验证明，蜂王浆具有重要的医疗保健作用和生物学功能，这可能与王浆中的MRJPs密切相关。近年来针对蛋白质及肽类结构和功能的研究不断深入，蜂王浆蛋白质及肽类物质分子水平的研究已成为蜂王浆研究中的一个热点。很多学者在明确了蜂王浆化学成分、营养价值及生理功能的基础上，将重点放在了MRJPs的研究上。实验证明东方蜜蜂和西方蜜蜂的蜂王浆组分不同，已有的对MRJPs方面的研究也证明东西方蜜蜂MRJPs存在一定的差异。 本文通过测定含中华蜜蜂主要王浆蛋白(Apis cerana cerana MRJPs， AccMRJPs)基因序列标签的部分cDNA克隆的全序列，获得了AccMRJP7、AccMRJP5和AccMRJP3a基因的全长cDNA，其中AccMRJP7基因为首次发现，其cDNA全长1557 bp，含一个长1350 bp的开放阅读框(ORF)，编码449个氨基酸。在此基础上，通过序列比对分析了部分蜜蜂主要王浆蛋白成员之间的进化关系，以及中华蜜蜂MRJPs与西方蜜蜂MRJPs和黑腹果蝇Yellow蛋白间的进化关系，发现AccMRJPs和AmMRJPs相应基因间高度同源，Yellow蛋白家族中Yellow-e3与MRJPs家族的进化关系较近。对AccMtLIP7、AccMRJP5和AccMRJP3a基因进行了表达方面的研究。AccMRJP7基因在大肠杆菌中成功表达，表达产物可达细胞总蛋白的22.8％，制备出的AccMRJP7融合表达的多克隆抗体效价高于1.024×10<'5>。AccMR3P5和AccMRJP3a基因在Bac to Bae系统中也实现了成功表达，并能与His单抗和所制备的AccMRJP7的多克隆抗体发生免疫反应，Western blot结果显示，Accmrjp5仅有一条特异性表达条带，而Accmrjp3a则有三条，表达产物分别占细胞总蛋白的15.1％和14.51％。

目录

摘要

前言

第Ⅰ部分文献综述

第一章蜜蜂生物学及蜂王浆研究概述

第二章东方蜜蜂和西方蜜蜂（MRJPs）研究进展

第三章昆虫杆状病毒表达系统研究进展

第Ⅱ部分研究背景、主要研究内容和技术路线

第四章立题依据、研究内容和技术路线

第Ⅲ部分研究内容

第五章AccMRJPs基因的序列测定与分析

第六章蜂王浆主要王浆蛋白基因的分子进化分析

第七章Accmrjp7的原核表达及多克隆抗体的制备

第八章Accmrjp5和Accmrjp3a在Bac to Bac系统中的表达

第九章利用AccMRJP5的真核表达产物进行果蝇生物学测定小结

结论

本研究的创新点

下一步研究方向

参考文献

致谢