论文创新点和研究意义
前言
第一章淫羊藿素及去甲淫羊藿素的雌激素样活性及作用机制研究
引言
1.1实验仪器与材料
1.2实验方法
1.2.1MCF-7细胞常规培养
1.2.2去激素血清的制备
1.2.3E-SCREEN法检测雌激素样活性
1.2.4雌激素受体完全拮抗剂对药物促增殖作用的拮抗作用
1.2.5流式细胞术检测MCF-7细胞周期的变化
1.2.6RT-PCR检测雌激素效应基因pS2,PgR mRNA表达水平的变化
1.2.7数据分析
1.3实验结果
1.3.1淫羊藿素和去甲淫羊藿素对MCF-7细胞的促增殖作用
1.3.2ICI 182,780对淫羊藿素及去甲淫羊藿素促MCF-7细胞促增殖活性的阻断作用
1.3.3淫羊藿素和去甲淫羊藿素对MCF-7细胞周期的影响
1.3.4淫羊藿素、去甲淫羊藿素对雌激素效应基因PgR,pS2表达的影响
1.4讨论
第二章淫羊藿素异戊烯基黄酮类衍生物雌激素样活性构效关系研究及机制研究
引言
2.1实验材料
2.2实验方法
2.2.1细胞增殖测定、细胞周期分析、基因表达检测方法同第一部分。
2.2.2Western Blot检测PgR蛋白
2.2.3计算机辅助构效关系研究
2.3实验结果
2.3.1淫羊藿素衍生物雌激素样活性及ICI182,780的拮抗作用
2.3.2异补骨脂黄酮对MCF-7细胞周期的影响
2.3.3异补骨脂黄酮对MCF-7细胞雌激素效应基因和蛋白表达的影响
2.3.4受体配体对接实验结果
2.4讨论
2.5小结
第三章异戊烯基黄酮类雌激素受体调节剂淫羊藿素对β淀粉样蛋白所致原代培养神经元损伤的保护作用
引言
3.1实验材料
3.2实验方法
3.2.1原代大鼠皮层神经元的培养
3.2.2免疫细胞化学法鉴定原代培养神经细胞
3.2.3组别设置和药物处理
3.2.4细胞活力测定
3.2.5细胞形态观察和突触评价
3.2.6AO/EB染色法检测细胞凋亡
3.2.7JC-1染色法检测细胞膜电位水平
3.2.8Western Blot检测蛋白表达变化
3.2.8分子对接法模拟配体受体亲和力
3.2.9统计学处理
3.3实验结果
3.3.1原代培养大鼠皮层神经元细胞的形态和鉴定
3.3.2Aβ25-35致神经细胞损伤模型的构建
3.3.3淫羊藿素对Aβ25-35致损伤模型中神经细胞的活力影响
3.3.4淫羊藿素对Aβ25-35致损伤模型中神经细胞的细胞形态学变化
3.3.5淫羊藿素对Aβ25-35致损伤模型中神经细胞的抗凋亡作用
3.3.6淫羊藿素对Aβ25-35致损伤模型中凋亡相关蛋白表达的影响
3.3.7ICI 182,780和PD 98059对淫羊藿素神经保护作用的阻断作用
3.3.8分子模拟和对接实验
3.4讨论
3.5结论
第四章异戊烯基雌激素受体调节剂淫羊藿素诱导小鼠胚胎干细胞定向分化为神经细胞的研究
前言
4.1实验仪器与材料
4.2实验方法
4.2.1ES细胞常规培养
4.2.2ES细胞体外定向分化为神经细胞培养
4.2.3药物诱导ES细胞分化为神经细胞
4.2.4小鼠ES细胞分化为神经细胞的形态学观察
4.3ES细胞分化过程中的生物信息和分化机制研究
4.3.1RT-PCR法检测神经分化过程中基因表达
4.3.2免疫荧光法检测神经特异性蛋白和发育相关蛋白表达
4.3.3流式细胞术定量检测标志蛋白阳性细胞
4.3.4WesternBlot检测蛋白表达
4.4实验结果
4.4.1MEF细胞、ES细胞及不同分化阶段的细胞形态观察
4.4.2异戊烯基黄酮类雌激素受体调节剂促进ES细胞体外定向分化为神经细胞
4.4.3淫羊藿素诱异胚胎干细胞分化为神经细胞过程中的生物信息和分化机制研究
4.4.4淫羊藿素诱异胚胎干细胞分化为胆碱能神经的免疫鉴定
4.4.5淫羊藿苷和异补骨脂黄酮对ES细胞分化为神经细胞的影响
4.5讨论
4.6小结
第五章生物活性导向法分离补骨脂中异戊烯基黄酮类雌激素受体调节剂
引言
5.1实验材料
5.2实验方法
5.2.1粗提物制备
5.2.2成分分离
5.2.3组分活性评价
5.3实验结果
5.5讨论
5.5小结
5.6附录:生物导向分离得到的雌激素样活性化合物结构鉴定数据及结构式
参考文献
综述雌激素受体调节剂及其及其在神经保护和发育中的药理活性研究进展
附录:博士在读期间所获科研成果情况
致谢