天目山自然保护区产抗微生物资源及其系统学研究

摘要

本文从天目山自然保护区分10条路径采集土样,对20份土样进行微生物系统分离和筛选,共获得霉菌145株,细菌65株。以I型聚酮合成酶(PKS I)基因和非核糖体肽合成酶(NRPS)基因这两个抗性相关基因为筛选标记进行筛选,并研究抗菌活性,并用16S rDNA和蛋白编码基因(gyrA和gyrB)序列分析相结合,确定它们的系统发育地位。 共得到基因组中含有PKS I基因或NRPS基因的细菌18株,其中8株检测到抗菌活性。筛选到的细菌全部鉴定到属,其中8株鉴定到种,3株(B5、B10、B27)可能是尚未被鉴定的菌株。 选取有抑菌能力且可能为新菌株的B27进行形态观察、培养条件、生理生化分析和16S rDNA系统发育分析,并研究了其NRPS基因序列。从一系列特征的分析得出,B27是一个未被鉴定的类芽孢杆菌属(Paenibacillus)菌株。由其NRPS基因部分序列预测其产生的抗性物质可能属于环脂肽类,并给出了进一步研究的建议。 结果表明,天目山自然保护区的原始环境中有着丰富的微生物资源。以抗性相关基因PKS I和NRPS基因为筛选标记,并在分子水平上进行菌株快速鉴定,具有与前人报道方法不同的较好的筛选效果。为最终挑选到的几个有理论与应用价值的菌株之深入研究提供了重要基础。

目录

声明

致谢

摘 要

前 言

材料与方法

1培养基

2试剂

3主要器材

4土样采集与保存

5土样中微生物的分离

6含PKSⅠ和NRPS基因的细菌的挑选

7抑菌实验

8细菌的分子水平快速鉴定

9类芽孢杆菌B27的基本特征研究和鉴定

实验结果

1土样中微生物分离结果

2基因组中含PKS Ⅰ或NRPS基因的细菌的筛选

3菌株抗菌活性检测

4细菌的分子水平快速鉴定结果

5类芽孢杆菌B27的基本特征研究和鉴定结果

讨 论

1菌株筛选方法的选择

2菌株的分子水平快速鉴定

3直接点种法测定抑菌能力

4 B27菌株的进一步研究和产物预测

参考文献

综述：蛋白编码基因在系统发育研究中的应用