siRNA干扰突变型p53对泌尿系统肿瘤的治疗作用及其机制研究

摘要

野生型p53(wild-typep53，wtp53)是重要的抑癌基因，可诱导细胞周期阻滞、凋亡、分化、静息、DNA损伤、血管生成和转移抑制。多种恶性肿瘤伴有wtp53的错义突变，以及大量突变型p53(mutantp53，mp53)蛋白的聚集。研究表明，wtp53丧失抑癌基因的功能后，一些mp53蛋白将获得新的功能，比如参与肿瘤细胞的增殖，提高肿瘤的化疗耐药性。这些新的变化被称作mp53的获得性功能(mutant p53 gain-of-function，mp53GOF)。mp53作为肿瘤治疗的一个有效靶点，成为目前肿瘤研究的重要方向之一。研究mp53GOF的重要方法是siRNA干扰试验，siRNA能有效沉默p53基因，排除显性负效应的干扰，为检测与研究mp53GOF提供了有力的技术支持。目前很少有研究探索抑制mp53在泌尿系统肿瘤治疗中的作用。
　　 本研究选择泌尿系统中的膀胱癌与前列腺癌作为研究对象。前者是我国发病率最高的泌尿系统恶性肿瘤，后者去势抵抗前列腺癌的治疗为临床难点。针对前列腺癌细胞株DU145、膀胱癌细胞株T24、5637，我们使用siRNA干扰技术，研究靶向mp53的siRNA对细胞生长、凋亡、以及化疗耐药性的影响，评估其治疗应用的可行性.主要研究内容及成果如下：
　　 1.mp53干扰后，体外细胞培养及RT-PCR检测发现：前列腺癌DU145、膀胱癌T24、5637细胞的mp53表达明显降低，p53-siRNA能有效抑制肿瘤细胞的生长和活力。MTT实验发现抑制作用呈时间-剂量依赖性。
　　 2.流式细胞术以及蛋白印记实验结果表明：干扰mp53后，DU145细胞阻滞在G1和G2期，而膀胱癌T24、5637表现为G2期细胞周期阻滞。同时，p53-siRNA具有较强的凋亡诱导能力，其诱导的凋亡可能与Bcl-2家族蛋白相关。
　　 3.mp53沉默后PI3K/Akt抗凋亡信号通路受到了抑制，可能是引起细胞凋亡和周期阻滞的作用机制之一。
　　 4.MTT法和流式细胞术结果提示p53-siRNA与cisplatin联用较两者单用更能明显抑制膀胱癌5637细胞活性，两者对抑制细胞存活率具有协同作用。
　　 总之，siRNA靶向抑制mp53或许能成为治疗泌尿系统肿瘤的一种有效手段，对于去势抵抗前列腺癌以及耐药性膀胱癌具有一定的治疗效果和应用前景。该技术也可以应用于其它具有mp53的恶性肿瘤研究与治疗中。但是，在临床应用之前，还需要进行进一步探索和验证，包括机理研究与动物实验等。