GAD67与bNOS在GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球中的表达和共存研究

摘要

GAD67-GFP基因敲入小鼠作为模式实验动物被广泛应用于生物医学实验中，尤其是在探测GAD67灵敏性方面优势尤为突出，因此GAD67-GFP基因敲入小鼠经常被用于GAD67相关神经元-γ氨基丁酸(GABA)能神经元的相关研究中。GABA是一种重要的抑制性神经递质，已有研究在嗅球各细胞层中均有GABA的分布。为了更精确的研究GABA在嗅球中的分布我们引入了GAD67-GFP基因敲入小鼠作为实验动物模型。一氧化氮(NO)也是一种重要的神经递质。已有研究表明在嗅皮质区，NO与GABA存在着共定位，而且二者在激活NMDA受体通路中存在着协同作用。然而在嗅球中还缺乏相关方面的研究。
　　 本实验首先通过对动物基因组进行PCR扩增，对小鼠进行基因型鉴定。取经基因型鉴定为阳性GAD67-GFP基因敲入小鼠嗅球做冰冻切片。尼氏染色(Nisslstaining)显示嗅球各细胞层排布分层。GAD67-GFP与DAPI双染探查嗅球中各细胞层中GAD67阳性神经元的分布比例。免疫荧光双标实验，探查GAD67-GFP与一氧化氮合酶(bNOS)在嗅球各细胞层的分布及共存情况。
　　 基因组PCR基因型鉴定表明阳性GAD67-GFP基因敲入小鼠基因组中含有GFP片段即琼脂糖凝胶电泳中出现750bp条带。Nissl染色结果清楚地显示嗅球共有三个细胞层即由表及里依次为：球旁细胞曾(GL)、僧帽细胞层(MCL)、颗粒细胞层(GCL)。GAD67-GFP与DAPI双染结果显示GAD67-GFP在嗅球各细胞层的分布比例分别为：42.98±0.92％(GL)、23.64±0.84％(MCL)、77.75±0.84％(GCL)。GAD67-GFP与bNOS免疫荧光双标实验结果显示：bNOS主要分布于GL与MCL，而在GCL未见有没有分布。GAD67与bNOS仅在嗅小球层偶有共存。