提高鸡繁殖力的抑制素制剂研制及应用效果研究

摘要

抑制素(Inhibin)是影响动物繁殖力的一种激素，它通过抑制垂体FSH的分泌影响动物的繁殖性能。抑制素免疫动物，产生的抑制素抗体能够中和内源抑制素，减少对FSH的抑制作用，从而促进卵泡发育，来增加排卵率。本论文选择对动物繁殖性能具有抑制作用的抑制素α亚基为研究对象，以霍乱毒素B亚基(cholera toxin B subunit，CTB)为基因佐剂来增强其免疫原性，构建CTB-Inhibinα（简称CTB-INHA）嵌合基因，并在大肠杆菌中进行融合表达，并用表达出的CTB-INHA融合蛋白作为疫苗滴鼻免疫萧山鸡，ELISA法检测鸡血清中抑制素抗体的水平，并统计分析免疫组与对照组鸡产蛋率的差异，检测CTB-INHA基因工程制剂的作用效果。
　　结果显示，我们成功得到了鸡抑制素α亚基成熟区片段和CTB-INHA嵌合基因，并在大肠杆菌中成功表达出了CTB-INHA融合蛋白，并将表达的蛋白进行纯化，Western-blot验证确为目的蛋白。用该融合蛋白免疫萧山鸡后，免疫鸡血清中明显产生了抗Inhibinα亚基的抗体，且持续时间较长。抗体的产生有效削弱了内源抑制素对鸡繁殖性能的抑制作用，免疫组鸡的繁殖性能均优于对照组。1～10月产蛋量提高9.91％，料蛋比降低7.69％，平均产蛋率提高8.71％。这些结果表明，本论文所研制的鸡抑制素融合蛋白(CTB-INHA)制剂能有效刺激鸡产生抗抑制素α亚基的抗体，减弱体内抑制素对鸡繁殖性能的抑制作用，提高了鸡的产蛋率。结论:采用主动免疫手段阻断对鸡繁殖性能起抑制作用的抑制素是一种提高鸡繁殖性能的有效途径。

目录

声明

摘要

致谢

前言

第一章 文献综述

1 抑制素的研究进展和发展趋势

1．1 抑制素简介

1．2 抑制素作用机制

1．3 抑制素免疫

2 黏膜免疫的研究现状和发展趋势

2．1 黏膜免疫的诱导部位

2．2 CMIS(common mucosal immune system，CM IS)

2．3 黏膜免疫的效应部位

2．4 粘膜疫苗的合理设计

2．5 粘膜佐剂

第二章 鸡inhibin α亚基的扩增及克隆

1 材料和方法

1．1 实验动物

1．2 克隆载体和宿主菌

1．3 酶和试剂盒

1．4 抗生素和培养基

1．5 主要的化学试剂

1．6 主要实验仪器

2、实验方法

2．1 鸡抑制素α亚基cDNA(INHA)的合成

2．2 鸡Inhibin α亚基基因扩增

2．3 鸡Inhibin α亚基基因的克隆

3 结果与分析

3．1 鸡INHA基因的PCR及阳性重组子电泳检测结果

4 讨论

第三章 CTB-INHA嵌合基因的构建及克隆

1 实验材料

1．1 Inhibin α亚基基因

1．2 表达载体和菌株

1．3 限制性内切酶

1．4 试剂盒

1．5 PCR试剂、连接试剂

1．6 主要化学试剂

1．7 主要实验仪器

2 实验方法

2．1 CTB与Inhibin α亚基(CTB-INHA)嵌合基因的构建

2．2 CTB-INHA表达载体的构建

3 结果

3．1 INHA／CTB-INHA PCR产物电泳图

3．2 CTB-INHA阳性克隆子的菌液PCR鉴定

3．3 CTB-INHA重组质粒的PCR及酶切鉴定

4 讨论

第四章 CTB-INHA融合蛋白的表达、鉴定及纯化

1 实验材料

1．1 菌株

1．2 主要化学试剂

1．3 主要实验仪器

2 实验方法

2．1 重组表达载体在大肠杆菌中的诱导表达

2．2 重组CTB-INHA蛋白的纯化

3 结果

3．1．CTB-INHA表达产物的SDS-PAGE检测

3．2 CTB-INHA的Western blot验证

4 讨论

第五章 CTB-INHA在萧山鸡中的应用效果研究

1 实验材料

2 实验方法

2．1 分组

2．2 免疫方法

2．3 免疫程序

2．4 免疫鸡血液采集

2．5 ELISA法测定鸡血清中的抑制素抗体水平

2．6 试验鸡繁殖性能的测定(包括产蛋率和料蛋比等)

3 实验结果

3．1 CTB-INHA融合蛋白滴鼻免疫鸡后的抗体产生情况

3．2 免疫组与对照组鸡繁殖性能的测定

总结与讨论

参考文献

中英文缩略词