桂枝汤化学成分液相色谱-质谱分析及其抗炎活性研究

摘要

中药方剂是中药临床应用的主要形式，通过几种中药配伍使用达到增效减毒的效果。其药效物质基础研究一直以来是中医药研究领域的热门课题。桂枝汤出自《伤寒论》，是由桂枝、甘草、白芍、大枣和生姜五味药材组成，被誉为“仲景群方之魁”。
　　本研究采用高分离度快速液相色谱-四级杆飞行时间质谱（RRLC-Q-TOF-MS）和高分离度快速液相色谱-二极管阵列-离子阱质谱（RRLC-DAD-IT-MS）联用方法对桂枝汤中的化学成分进行定性分析研究。共检测到187个成分，通过比较保留时间、准确分子量和UV谱，同时结合诊断性离子和特征性裂解途径，鉴定或推测了144个成分，其中31个化合物通过与标准品对照得到确证。采用大孔树脂和制备液相色谱将桂枝汤提取物分段制备成64个组分。通过LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型，以抑制细胞NO分泌量为指标，对桂枝汤及其组分的体外抗炎活性进行了评价。结果表明，34个桂枝汤组分具有一定的抗炎活性。采用RRLC-DAD-IT-MS方法对桂枝汤34个活性组分的化学成分进行液质分析，并对其中13个单体化合物的抗炎活性进行实验验证。结果显示，甘草查尔酮A对LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型的NO抑制率IC50值为（3.9±0.6）μM;甘草苷和芒柄花苷在50.0μM浓度时具有一定的抗炎活性，芍药苷和芦丁在200.0μM时才具有较强的抗炎活性。该方法能够在一定程度上降低活性成分发现的盲目性。

目录

声明

致谢

摘要

缩略语

1 绪论

1．1 桂枝汤及其单味药材化学成分研究进展

1．1．1 桂枝汤化学成分研究进展

1．1．2 单味药材化学成分研究进展

1．2 桂枝汤及其单味药材药理活性研究进展

1．2．1 桂枝汤药理活性研究进展

1．2．2 单味药材药理活性研究进展

1．3 高分辨质谱在方剂中的应用

1．3．1 化学成分定性分析研究

1．3．2 组分定量分析研究

1．3．3 化合物裂解规律分析研究

1．4 本论文研究内容

2 桂枝汤化学成分的液相色谱-质谱定性分析

2．1 引言

2．2 实验仪器、试荆及药材

2．2．1 实验仪器

2．2．2 实验试剂及药材

2．3 实验方法

2．3．1 桂枝汤及各单味药材提取方法

2．3．2 标准品溶液的制备方法

2．3．3 RRLC-Q-TOF-MS分析条件

2．3．4 RRLC-DAD-IT-MS分析条件

2．4 结果与讨论

2．4．1 来自甘草的化合物

2．4．2 来自白芍的化合物

2．4．3 来自大枣的化合物

2．4．4 来自其它药材的化合物

2．4．5 来自五种药材的其它类化合物

2．5 本章小结

3 桂枝汤抗炎活性评价

3．1 引言

3．2 桂枝汤组分削备

3．2．1 实验仪器、试剂及材料

3．2．2 大孔树脂处理

3．2．3 液相制备组分

3．3 桂枝汤组分的抗炎活性评价

3．3．1 实验试剂、仪器及样品

3．3．2 实验方法

3．3．3 结果与讨论

3．4 本章小结

4 桂枝汤中抗炎活性成分研究

4．1 引言

4．2 实验仪器、试剂及方法

4．3 结果与讨论

4．3．1 桂枝汤制备组分的液质分析

4．3．2 单体抗炎活性验证

4．4 本章小结

5 总结与展望

参考文献

作者简历

附表