Beclin1对雌激素受体阳性乳腺癌的三苯氧胺敏感性和预后的影响及相关机制

摘要

研究背景:
　　乳腺癌是女性最为常见的恶性肿瘤，其中70％为雌激素受体(ER)阳性的患者。以三苯氧胺等为代表的内分泌治疗是ER阳性的乳腺癌最有效的治疗方法之一，然而耐药情况的发生使乳腺癌患者难以从中获益。Beclin1在疾病中的作用往往归咎于其在自噬中的重要表现，然而除此以外，因Beclin1是Vps34/PI3KC3复合物的核心成员，它在调控膜转运事件中也有重要作用。Beclin1在调节众多肿瘤细胞的生存和死亡中发挥了重要作用，但其在ER阳性乳腺癌中的作用仍然未知。
　　研究目的:
　　研究Beclin1对ER阳性乳腺癌的三苯氧胺敏感性及预后的影响及相关机制。
　　研究方法与结果:
　　本课题使用免疫组织化学染色检测乳腺癌组织标本中Beclin1的表达，发现Beclin1在ER阳性乳腺癌中的表达水平和人类表皮生长因子受体2（HER2）表达水平存在正相关(P＜0.01)，而与ER阳性乳腺癌患者的总生存期存在负相关(P＜0.01)。通过生物信息学方法（Kaplan Meier Plotter数据库）发现，在经三苯氧胺治疗的ER阳性乳腺癌患者中，Beclin1的表达与总生存期存在负相关(P＜0.05)。本课题通过体外细胞培养的方法建立了ER阳性的人乳腺癌细胞系MCF-7的三苯氧胺耐药株MCF-7R。采用Western Blot检测发现在MCF-7R细胞中Beclin1和HER2的蛋白表达水平均高于MCF-7细胞。接下来，我们运用siRNA瞬时转染的方法下调了MCF-7和MCF-7R细胞中Beclin1的蛋白表达水平。进一步的研究发现下调了Beclin1的MCF-7和MCF-7R细胞生长能力有一定减弱而凋亡有一定的增加。更为有趣的是，下调了Beclin1的MCF-7和MCF-7R细胞对三苯氧胺的敏感性明显高于对照组细胞，表现为在三苯氧胺作用下细胞体外增殖能力和克隆形成能力减弱，凋亡增加，细胞周期G0/G1期阻滞增加以及迁移、侵袭的能力减弱。接着采用Western Blot和qPCR的方法发现下调了Beclin1的MCF-7和MCF-7R细胞中HER2的表达水平均低于转染了阴性对照siRNA细胞。在三苯氧胺作用后，下调Beclin1的MCF-7和MCF-7R细胞HER2表达水平依旧低于对照组，此外，相对于转染阴性对照siRNA组的细胞，它们的磷酸化Akt和磷酸化ERK1/2的蛋白表达水平下调，凋亡蛋白caspase-3和PARP剪切体表达水平上调，抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平下调，而自噬相关蛋白LC3B的表达水平的变化不显著。我们运用慢病毒介导RNA干扰MCF-7细胞中的Beclin1表达并建立了稳定低表达Beclin1的细胞株MCF-7/Beclin1和对照细胞株MCF-7/V。我们发现与之前结果相似地，MCF-7/Beclin1相较于MCF-7/V的三苯氧胺敏感性较高而且HER2表达水平较低。我们运用过表达质粒上调MCF-7/Beclin1中的HER2表达，发现可以一定程度上逆转MCF-7/Beclin1对三苯氧胺的相对高敏感性。在三苯氧胺作用下，相对于转染阴性对照质粒的MCF-7/Beclin1细胞，过表达HER2的MCF-7/Beclin1体外增殖能力和克隆形成能力增加，细胞凋亡减少，细胞G0/G1期阻滞也相对减少。此外，在三苯氧胺作用下， MCF-7/Beclin1细胞过表达HER2后可以逆转之前变化的磷酸化Akt和ERK1/2蛋白和凋亡相关蛋白的表达水平。
　　研究结论:
　　本课题发现ER阳性乳腺癌组织中的Beclin1表达与HER2表达之间正相关，并与患者的预后负相关。首次提示下调Beclin1表达可能通过调节HER2表达水平的下降而引发ER阳性乳腺癌三苯氧胺敏感性的增加。因此，Beclin1可能是克服ER阳性乳腺癌三苯氧胺耐药的潜在治疗靶点。

目录

声明

致谢

摘要

缩写及符号清单

主要实验设备仪器

绪论

第一章 Beclin 1与雌激素受体阳性乳腺癌的临床病理指标及预后的相关性研究

1．1 材料和方法

1．2 结果

1．3 讨论

1．4 小结

第二章 Beclin 1和ER阳性乳腺癌细胞三苯氧胺敏感性的关系

2．1 材料与方法

2．2 实验结果

2．3 讨论

2．4 小结

第三章 Beclin 1依赖HER2诱导乳腺癌三苯氧胺敏感性改变的作用机制

3．1 材料和方法

3．2 实验结果

3．3 讨论

3．4 小结

全文结论

参考文献

综述 Beclin 1在肿瘤中的研究进展

作者简历及在学期间所取得的科研成果