基于铂离子与鸟嘌呤配位结合的铂类药物检测新方法

摘要

在过去的三十年中，以铂类药物为主或者参加配伍的化疗方案被广泛用于癌症的治疗。为了更好地研究铂类抗癌药物及其代谢产物在体内的作用机制和药动学，需要对给药后的生物样本中的Pt2+离子进行一个精准的定量。现有的检测方法主要包括ICPMS、光谱、色谱以及一些联用方法。不同方法各有其优缺点，其中ICPMS技术最为成熟且最为常用，但是该方法需要大型仪器，成本高昂且较为耗时。因此，发展一种成本低廉、简单快速而高选择性高灵敏度的铂离子检测方法具有十分广泛的应用前景和重要意义。
　　近年来，适配体技术逐渐发展起来用于重金属离子的检测，如与荧光、电化学技术或者比色法联用来检测铅离子、汞离子等。然而该技术应用于铂离子的检测的相关报道不多，而实验室常用的实时荧光定量PCR技术用来检测铂离子还未见相关报道。众所周知，铂离子会与DNA链上的鸟嘌呤发生交联，形成的配位结构可以代替传统的沃森-克里克碱基互补配对维持或增强DNA双链结构的稳定性。以此为出发点，本论文构建了两种具有创新意义的铂类化合物的检测方法，实现了对生物样本中铂离子的简单快速、高灵敏度和高选择性检测，整个论文分为以下三个部分:
　　1.绪论
　　绪论主要阐述了本论文的研究目的、意义、主要内容及创新之处。
　　2.基于配位结合的铂离子化学发光适配体检测新技术
　　本节建立了一种基于铂离子与鸟嘌呤配位结合的适配体传感技术用于血清或其他生物样品中铂类药物的检测。该适配体传感器是由一条重新设计的FITC标记链霉亲和素(SA)适配体序列组成，序列中几个碱基对被GG错配替代。只有在铂离子存在的条件下，才会形成配位结构使适配体构象完整，结合到链霉亲合素修饰的磁珠上进行磁性分离，最后加入抗FITC修饰的辣根过氧化物酶(HRP)，分离洗涤后加入化学发光底物进行检测。该方法的定量范围为0.12-240μM，检测限可达60nM(50ng/mL)，选择性较强且已成功用于尿液样本中铂离子的测定。
　　3.基于配位结合的铂离子荧光定量PCR检测新技术
　　本节结合实时荧光定量PCR技术，构建了一种具有创新意义的Pt2+离子检测技术。Pt2+离子与鸟嘌呤上的N7原子形成较强的配位键后将DNA链螯合掉，影响PCR扩增，产生较少的荧光信号。而help引物的加入放大了这种影响，反向引物的前体Pre-reverse引物可以其为模板延伸形成反向引物进而用于后续的PCR反应，相当于Pt2+离子与Pre-reverse引物竞争结合help引物。该方法简单、快速，灵敏度可达10ng/mL。

目录

声明

致谢

摘要

缩略词

目次

1 绪论

1．1 铂类药物作用机制

1．2 适配体技术

1．3 实时荧光定量PCR技术

1．4 本论文的主要研究内容及创新点

2 基于配位结合的铂离子化学发光适配体检测新技术

2．1 前言

2．2 实验部分

2．3 结果与讨论

2．4 结论

3 基于配位结合的铂离子实时荧光定量PCR检测新技术

3．1 前言

3．2 实验部分

3．3 结果与讨论

3．4 结论

参考文献

综述：铂类药物分析方法研究进展

作者简历