EGFr-TKIs抑制溶酶体功能导致SQSTM1积聚在非小细胞肺癌EGFr-TKIs耐药中的作用和机制

摘要

背景:
　　表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)，在晚期非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC)的治疗中占据了十分重要的地位。然而，原发以及快速发生的获得性耐药导致EGFR-TKIs在NSCLC的治疗中遭遇了诸多困境。因此，寻找能够有效增敏EGFR-TKIs或逆转NSCLC耐受EGFR-TKIs的方法具有重要的临床意义。而作为介导细胞自噬、能量感应、氧化应激等多个信号通路的关键配体蛋白SQSTM1在肿瘤的发生发展及耐药中均发挥了非常重要的作用，但SQSTM1是否也参与调控肺癌细胞耐受EGFR-TKIs的过程尚未见报道。
　　目的:
　　探讨EGFR-TKIs是否引起SQSTMI的表达变化及其可能机制，揭示SQSTM1在NSCLC EGFR-TKIs耐药中的作用，为临床上逆转NSCLC等恶性肿瘤的EGFR-TKIs耐药提供理论依据。
　　方法:
　　利用western blot研究EGFR-TKIs(Gefitinib、Erlotinib和AZD9291)对SQSTM1的表达调控作用、敲减SQSTM1联合EGFR-TKIs引起的凋亡蛋白的表达变化、EGFR-TKIs对自噬相关蛋白的调控作用;运用MTS实验验证敲减SQSTM1对EGFR-TKIs的增敏作用、过表达SQSTMI引起的EGFR-TKIs抵抗;通过流式细胞术分析敲减SQSTMI联合EGFR-TKIs对肺癌细胞凋亡的影响;通过转染siRNA或质粒的方法研究敲减或过表达SQSTM1对EGFR-TKIs杀伤NSCLC敏感性的影响;利用定量PCR检测EGFR-TKIs处理非小细胞肺癌后对SQSTM1mRNA水平的影响;利用免疫荧光技术检测EGFR-TKIs对自噬状态以及溶酶体功能的影响。
　　结果:
　　EGFR-TKIs(Gefitinib和AZD9291)以浓度梯度和时间梯度依赖的方式上调SQSTM1的蛋白水平，敲减SQSTMI可以通过诱导凋亡而明显增敏EGFR-TKIs对NSCLC的杀伤效果，而过表达SQSTM1则会提高NSCLC对EGFR-TKIs(Gefitinib和AZD9291)的耐受。我们研究发现，EGFR-TKIs(Gefitinib和AZD9291)对SQSTMI的转录水平没有明显影响，而是通过阻断细胞自噬来抑制其蛋白降解而上调其水平。我们进一步研究发现，EGFR-TKISs(Gefitinib和AZD9291)并未阻断自噬体的形成及自噬体与溶酶体的融合，而是通过抑制溶酶体的功能来抑制细胞自噬。
　　结论:
　　EGFR-TKIs(Gefitinib和AZD9291)通过抑制溶酶体功能来阻断自噬过程，从而抑制SQSTM1通过自噬途径的降解，由此引起的SQSTM1的高表达导致NSCLC产生EGFR-TKIs(Gefitinib和AZD9291)耐药，而敲减SQSTM1可以明显增加EGFR-TKIs(Gefitinib和AZD9291)对NSCLC的杀伤效果。

目录

声明

致谢

摘要

英文缩略词表

1 引言

2 材料和方法

2．1 主要仪器和试剂

2．2 实验方法

3 实验结果

3．2 SQSTM1的上调促进了EGFR-TKIs(Gefitinib和AZD9291)的获得性耐药

3．3 SQSTM1敲减促进了EGFR-TKIs(Gefitinib和AZD9291)诱导的NSCLC凋亡

3．4 EGFR-TKIs(Gefitinib和AZD9291)通过阻断SQSTM1的蛋白降解而导致其高表达

3．5 EGFR-TKIs(Ge6tinib和AZD9291)通过阻断自噬而抑制SQSTM1的蛋白降解

3．6 Gefitinib促进自噬体的形成且不影响自噬体和溶酶体的融合

3．7 EGFR-TKIs(Gefitinib和AZD9291)抑制溶酶体的功能

3．8 EGFR-TKIs(Gefitinib和AZD9291)抑制溶酶体的酸化

4 讨论

5 结论

参考文献

综述

作者简历及在学期间发表的文章