嘉兴黑猪TFAM和TFB2M基因表达及其与胴体和肉质性状的相关分析

摘要

本研究以嘉兴黑猪为对象，采用DNA直接测序、实时荧光定量PCR、克隆等方法得到线粒体转录因子A（TFAM）基因的cDNA序列并利用生物信息学分析了TFAM蛋白的结构和理化性质，探索了TE4M和TFB2M基因的mRNA表达规律对嘉兴黑猪胴体和肉质性状的影响，为开展嘉兴黑猪肉质、胴体性状的候选基因相关研究提供依据。试验主要结果如下:
　　1.获得了嘉兴黑猪TFAM基因的cDNA序列，并通过生物信息学软件分析了TFAM蛋白的结构和理化性质。结果表明，TFAM蛋白ORF长741bp，编码246个氨基酸。其理论等电点PI为9.62表明TFAM是碱性的，同时，TFAM蛋白氨基酸序列不存在跨膜螺旋结构，不属于膜蛋白或分泌蛋白。
　　2.采用实时荧光定量PCR检测了TFAM基因和TFB2M基因在嘉兴黑猪各组织中的表达量。发现TFAM基因表达规律是:脾＞胃＞肝＞心＞皮脂＞腹脂＞肺＞腿肌;TFB2M基因表达规律是:脾＞皮脂＞腹脂＞心＞胃＞肝＞腿肌＞肺。
　　3.本试验同时测定了嘉兴黑猪及配套组合猪的常规肉质性状、胴体性状以及背最长肌中的风味物质（肌苷酸、肌内脂肪、脂肪酸和氨基酸），结果表明(1)嘉兴黑猪的系水力是最高的。在嘉兴黑猪杂交品种中，杜巴嘉的肉色评分、系水力均高于巴嘉、杜长嘉和巴克夏猪，但差异不显著（P＞0.05）;大理石纹评分显著高于巴嘉、杜长嘉和巴克夏猪（P＜0.05）。(2)嘉兴黑猪的屠宰率和瘦肉率显著低于其他品种（P＜0.05），6-7肋膘厚、皮厚、皮脂率显著高于外来品种巴克夏猪（P＜0.05）。巴克夏猪的眼肌面积极显著高于其他品种猪（P＜0.01），杜巴嘉和杜长嘉的眼肌面积也极显著高于嘉兴黑猪和巴嘉猪（P＜0.01）。杜巴嘉猪的瘦肉率高于巴克夏猪，但差异不显著（P＞0.05），极显著高于巴嘉和嘉兴黑猪(P＜0.01)。(3)在测定的5个品种中，嘉兴黑猪背最长肌中肌内脂肪含量和肌苷酸含量都是最高的。嘉兴黑猪、巴嘉、杜巴嘉和杜长嘉猪背最长肌的肌内脂肪含量显著高于巴克夏猪（P＜0.05）。(4)嘉兴黑猪的饱和脂肪酸含量、单不饱和脂肪酸含量、饱和脂肪酸和总不饱和脂肪酸的比值都是显著高于外来品种巴克夏猪的(P＜0.05)。杜长嘉猪的亚油酸含量是最高的，与杜巴嘉猪和巴嘉猪呈极显著差异（P＜0.01）。嘉兴黑猪的二十二碳六烯酸(DHA)含量是最高的，极显著高于其他品种（P＜0.01）。(5)嘉兴黑猪背最长肌中16种氨基酸除丝氨酸外，氨基酸总量、鲜味氨基酸、必需氨基酸以及必需氨基酸占氨基酸总量的比值极显著高于巴克夏猪的（P＜0.01）。在杂交品种中，杜巴嘉猪背最长肌中氨基酸总量、鲜味氨基酸、必需氨基酸含量均高于杜长嘉、巴嘉和嘉兴黑猪，但品种间差异不显著(P＞0.05)，杜巴嘉猪的谷氨酸含量为最高。
　　4.TFAM基因在嘉兴黑猪肺和腿肌中的表达量均与肉色呈显著正相关(P＜0.05);在胃中的表达量与皮脂率和谷氨酸含量呈显著负相关（P＜0.05）;在心中的表达量与宰前活重和肌苷酸含量呈极显著的正相关(P＜0.01);在肝脏中的表达量与大理石纹、系水力、三点平均膘厚和肌内脂肪含量呈显著正相关(P＜0.05)，与失水率和6-7肋膘厚呈显著负相关(P＜0.05);在脾中的表达量与亚油酸含量呈显著负相关(P＜0.05);在皮脂表达量与大理石纹、6-7肋膘厚、肌苷酸含量和肌内脂肪含量呈显著正相关（P＜0.05），与三点平均膘厚呈极显著的负相关（P＜0.05）;在腿肌中表达量与大理石纹、6-7肋膘厚、皮脂率和肌内脂肪含量呈显著正相关（P＜0.05）。
　　5.TFB2M基因在嘉兴黑猪脾中的表达量与大理石纹呈显著负相关(P＜0.05);在肝脏、心中的表达量与腿臀比有显著差异，呈正相关（P＜0.05）;在肺中的表达量与眼肌面积呈显著正相关（P＜0.05）;在胃中的表达量与肉色呈显著负相关（P＜0.05），与亚油酸含量呈显著正相关（P＜0.05）;在皮脂中的表达量与大理石纹、系水力、皮脂率和肌内脂肪含量呈显著正相关（P＜0.05），与谷氨酸含量呈极显著正相关（P＜0.01）;在腹脂中的表达量与与腿臀比呈显著正相关（P＜0.05）;在腿肌中的表达量与嫩度、肌内脂肪含量呈显著正相关（P＜0.05）。

目录

声明

论文说明

缩写词表(Abbreviations)

摘要

1．1 研究背景

1．2 嘉兴黑猪的概况

1．3 猪肉质性状的研究现状

1．4 线粒体的生物学功能

1．5 线粒体DNA转录机器

1．5．1 TFAM基因研究现状

1．5．2 TFB2M基因研究现状

1．6 研究目的意义与研究内容

第二章 嘉兴黑猪TFAM基因的克隆和生物学信息分析

2．1 材料与方法

2．1．1 实验材料

2．1．2 方法

2．1．3 总RNA的提取与检测

2．1．4 逆转录反应

2．1．5 PCR反应

2．1．6 PCR产物的纯化与回收

2．1．7 RT-PCR产物克隆

2．1．8 TFAM生物信息学分析

2．2 结果与分析

2．2．1 总RNA提取的结果

2．2．2 cDNA的PCR扩增

2．2．3 目的片段的测序结果

2．2．4 TFAM基因的序列分析

2．3 讨论

2．3．2 嘉兴黑猪TFAM基因的生物学信患分析

2．4 小结

第三章 嘉兴黑猪及其配套组合胴体性能、肉质性状及肌肉风味物质的测定

3．1 材料与方法

3．1．1 试验材料

3．1．2 方法

3．1．3 统计分析

3．2 结果与分析

3．2．1 不同品种猪的常规肉质性状比较

3．2．2 不同品种猪的胴体性状比较

3．2．3 不同品种猪的背最长肌肌肉营养成分比较

3．2．4 不同品种猪的背最长肌脂肪酸含量比较

3．2．5 不同品种猪的背最长肌氨基酸含量比较

3．3 讨论

3．3．1 不同品种对猪肉质性状的影响

3．3．2 不同品种对猪胴体性状的影响

3．3．3 不同品种对猪背最长肌肌苷酸和肌内脂肪含量的影响

3．3．4 不同品种对猪背最长肌脂肪酸含量的影响

3．3．5 不同品种对猪背最长肌氨基酸含量的影响

3．4 小结

第四章 TFAM和TFB2M基因在嘉兴黑猪不同组织中的差异表达分析

4．1 材料与方法

4．1．1 试样材料

4．1．2 方法

4．1．3 数据分析

4．2 结果与讨论

4．2．2 TFAM和TFB2M基因在嘉兴黑猪不同组织中的表达规律

4．2．3 TFAM和TFB2M基因表达量与内质和胴体性状的关联性分析

4．3 讨论

4．3．2 TFAM和TFB2M基因表达量与肉质性状和胴体性状的相关研究

4．3．3 TFAM和TFB2M基因表达量与嘉兴罴猪背最长肌中肌内脂肪、肌苷酸、谷氨酸、亚油酸含量的关联性分析

4．4 小结

5．1 研究的主要结论

5．2 创新点

5．3 研究展望

参考文献

作者简历及在读期间所取得的科研成果

致谢