灯盏细辛预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡及SOCS-3表达影响的实验研究

摘要

目的:研究灯盏细辛对细胞凋亡及细胞因子信号转导抑制因子-3在大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织中的动态表达特点,从而为中药防治脑缺血再灌注损伤提供实验依据。
　　 方法:将体重为280g～320g的雄性SD大鼠90只随机分为假手术组(SG),对照组(CG)及实验组(EG),其中对照组及实验组再随机分为缺血2h再灌注3h、6h、12h、24 h、48h,、72h、7d7个时间点,每个时间点6只大鼠,其中每组一只用于TTC染色。运用改良线栓法制作局灶脑缺血再灌注模型,实验组术前两周每日胃灌注灯盏细辛注射液20Mg／Kg体重。于再灌注时判断其神经功能缺损情况,参照longa[1]评分标准,表现为1-3分,纳入实验。分别于再灌注后7个时间点进行神经功能评分；并分批处死大鼠,断头开颅取出脑组织。取缺血区脑组织,对其进行切片,切成4片,其中1片用于干湿重法测定脑组织含水量,1片用于TUNEL法测定凋亡细胞,1片用于RT-PCR法测定SOCS-3的含量,第4片用来做病理染色。假手术组右侧大脑半球脑组织处理方法同上。
　　 结果:(1)行为学评分比较:假手术组没有神经功能缺损,EG及CG均有神经功能缺损,各时间点EG与CG比较神经功能评分有显著差异(P<0.05)。(2)脑组织含水量:EG及CG病灶侧与假手术组比较,脑组织含水量6h开始增加,24 h时达高峰；而EG与CG相比,增高幅度较之为低(P<0.05)。(3)病理学变化:术后24小时,假手术组:未见明显病理性改变；对照(CG)组:缺血区域组织结构破坏,间隙疏松,细胞肿胀变形,胞核缩小、消失,炎细胞浸润；实验(E G)组:明显轻于对照(CG)组。(4)神经细胞凋亡测定:应用TUNEL法在光学显微镜下观察。假手术组偶见阳性细胞；对照组及实验组凋亡细胞于再灌注后逐渐增加,24小时达高峰,以后逐渐减少；实验组(EG)凋亡区域分布较C G少,凋亡细胞数目也较C G低(P<0.05)。(5)SOCS-3mRNA含量变化:假手术组:SOCS-3表达量恒定；C G及E G:SOCS-3表达在再灌注早期就明显升高,24h时达高峰,随后表达逐渐降低,但至再灌注7d时表达仍高于假手术组,而EG与CG比较,其在6h～7d的表达量较对照组高(P<0.05)。
　　 结论:(1)使用改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型操作方便、成功率较高,是研究脑缺血再灌注损伤较为理想的模型。(2)大鼠脑缺血再灌注后可引起脑组织含水量增高和细胞凋亡,导致神经功能损害。(3)大鼠脑缺血再灌注时SOCS-3的表达增高,该因子可减轻炎症反应、脑组织水肿和细胞凋亡,保护神经元。(4)灯盏细辛在大鼠脑缺血再灌注损伤中可诱导SOCS-3表达进一步上调,更好地抑制炎症级联反应,减轻脑组织水肿,减少细胞凋亡。

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细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS-3)与缺血性脑血管病 (综述)

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