BMSCs移植与电针联合应用对脑出血大鼠局部血流调节因子和JNK信号通路的影响

摘要

目的：观察 BMSCs 移植联合电针应用对脑出血 JNK 信号通路中(p-JNK,MEK4,MEK7)在周围脑组织的表达,及局部血流调节因子(ET-1,CGEP)的表达,来探讨电针刺激能否激活JNK信号通路抑细胞凋亡,保护神经元,促进 BMSCS 的增殖,分化 治疗脑出血的疗效。方法：将-80℃冷冻保存的 BMSCs 复苏,培养,床代、诱导后通过脑立体定位仪采用胶原酶和肝素(2：1)比例混合3微升,注入尾状核。不同时间点进行 NSS 神评分,并随机分为： Control 组 、BMSCs组 、 Ea BMSCs组 和单纯 Ea组四大组。在术后第3天时通过脑立体定位仪,原孔道将 20ml0.9%生理盐水 和 20ml 细胞悬液移植入大鼠病灶中。五个亚组在1d、3d、5d、7d、14d,给予响应时间点进行NSS评分。电针组于移植2h后,进行电针治疗,到处死。通过蛋WB检测各亚组不同时间点磷酸(基)-N端JNK激酶/应激激活的蛋白激酶,(Phospho-JNK/SAPK)、MEK4、MEK7和GAPDH的表达。 在1d、3d、5d、7d、14d相应时间点,断头处死,SD大鼠,取病灶脑组织,匀浆,取上清,通过放射免疫分析法测定脑组织 ET一1和CGRP。结果：1.移植后,BMSCs组和Control组第5天时评分比较存在显著性差异,有统计学意义(P<0.05)；Ea BMSCs组和Control组相比较第 3、5、7、17 天有显著差异(P<0.05),ICH 大鼠改善神经功能缺失症状得到改善。2. 各组p-JNK表达2天达高峰,7天时下降；相同时间点,BMSCs组、Ea BMSCs组、EA组明显低于ontroCl组蛋白表达,P<0.05,差异有统计学意义；BMSCs 组、EA 组低于Ea BMSCs组蛋白表达,P<0.05, 差异有统计学意义；BMSCs组、EA组蛋白表达无明显差异,P﹥0.05. 无统计学意义,3. 相同时间点, BMSCs组、 Ea BMSCs组、 EA组MEK4蛋白低于ontroCl组蛋白表达,P<0.05,差异有统计学意义；BMSCs组、EA组低于Ea BMSCs组蛋白表达,P<0.05, 差异有统计学意义；4. 相同时间点, BMSCs组、 Ea BMSCs组、 EA组MEK7蛋白低于ontroCl组蛋白表达, P<0.05,差异有统计学意义；BMSCs组、EA组低于Ea BMSCs组蛋白表达,P<0.05, 差异有统计学意义；5. MSCs组,EBa BMSCs组, EA组内皮素(ET-1)表达低于Control组,P<0.05 ,有统计学意义；BMSCs组, EA组 内皮素(ET-1)表达低于 EA BMSCs 组,P<0.05有统计学意义；6. MSCs 组,EBa BMSCs 组,EA 组降钙素相关肽(CGRP) 表达低于Control组,P<0.05 ,有统计学意义； BMSCs组, EA组降钙素相关肽(CGRP)表达低于 EA BMSCs 组,有统计学意义；结论：1.BMSCs移植激活ICH病灶周围组织JNK信号通路,从而抑制受损脑组织的凋亡,保护神经元。2.电针刺激和BMSCs联合应用,较单纯BMSCs移植更容易激活JNK信号通 路蛋白表达,抑制受损脑组织的凋亡,恢复大鼠神经缺失症状。3.联合移植能上调局部血流调节因子,ET-1和CGRP的表达。改善局部血流,利于ICH大鼠损伤脑组织的修复和促进外源性BMSCs的存活。

目录

封面

目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料与方法

1 实验材料与仪器

2 实验试剂

3主要实验仪器

4 实验方法

结果

1 NSS评分

2. Phospho-JNK/SAPK蛋白的表达

讨论

结论

参考文献

英汉缩略对照表

JNK信号通路与脑出血损伤的关联性探讨