神经节苷酯对实验性脑出血脑细胞凋亡相关蛋白表达的影响

摘要

目的：本实验拟通过建立大鼠脑出血模型,并予以神经节苷酯干预,检测大鼠脑出血后血肿周围组织内细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白Fas、FasL、Bax、Bcl-2的表达变化,以探讨神经节苷酯对脑细胞凋亡的影响。方法：1.实验分组：雄性SD大鼠48只体重均为250~300克,采用随机数字法将其分为3组：假手术组(n=8),脑出血组(ICH组)(n=20),脑出血+神经节苷酯治疗组(GM1组)(n=20),每组按处死时间点不同分为6h,24h,3d,7d四个亚组。2.大鼠脑出血模型制备：运用脑立体定位仪制备自体全血注入法大鼠脑出血模型。ICH组和GM1组采用断尾取血,全血颅内注入法制作脑出血模型,假手术组只进针不注血。3.模型成功评价。4.药物干预：GM1组在术后即刻以神经节苷酯30mg/kg注入大鼠腹腔,ICH组以及假手术组用等量生理盐水代替。5.神经功能障碍评分：采用Garcia评分方法进行评分,最低3分,最高18分,分数越高则神经功能损害越轻,分数越低则神经功能损害越重。6.标本提取及检测：各组大鼠在指定时间点处死,断头取脑,制作脑组织切片。采用原位末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡,免疫组化法检测凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2,Fas,FasL表达情况,进行分析并测定其平均积分光密度(AIOD值)。7.统计分析：采用方差分析和Person直线相关分析。结果：1. GM1组术后神经功能障碍较脑出血组轻(P<0.05)。2.TUNEL染色显示：ICH组和GM1组细胞凋亡较假手术组明显(P<0.05)；GM1组细胞凋亡较ICH组减轻(P<0.05)。3.免疫组化显示：GM1组各个时间点促凋亡蛋白Bax、Fas、FasL的表达量均低于ICH组(P<0.05),抑凋亡蛋白Bcl-2的表达量均高于ICH组(P<0.05)。4.直线相关性分析：Bax蛋白表达与脑细胞凋亡呈正相关(r=0.821,P<0.01)；Bcl-2蛋白表达与脑细胞凋亡呈负相关( r=-0.666 , P<0.01 )；Fas蛋白表达与脑细胞凋亡呈正相关( r=0.415 , P<0.01 )；FasL蛋白表达与脑细胞凋亡呈正相关(r=0.775,P<0.01)。结论：1.细胞凋亡机制参与了脑出血后继发性脑损伤。2. 神经节苷酯对大鼠脑出血有明显的神经保护作用,其机制可能是通过上调抑凋亡蛋白,下调促凋亡蛋白的表达来实现的。

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中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

1、 实验材料和仪器

2 主要实验试剂

3 主要实验仪器

4 实验方法

5、统计学处理

结果

1模型成功评价

2神经功能评分

3 HE染色

4 细胞凋亡TUNEL染色结果

5 免疫组化检测结果

6 相关性分析结果

附图

讨论

1 大鼠脑出血模型的建立及评价

2 脑出血后的病理生理变化

3 脑出血与细胞凋亡

4 细胞凋亡途径及其信号转导途径

5 神经节苷酯的神经保护机制

结论

参考文献

中英文词汇缩略表

致谢

脑出血后继发性脑损伤致细胞凋亡途径的研究进展

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