eIF4E在急性髓细胞白血病中的表达研究

摘要

目的:
　　1、通过RT-PCR法检测急性髓细胞白血病(AML)与非肿瘤对照者骨髓标本eIF4E的表达情况，比较eIF4E在AML与非肿瘤对照组之间的表达差异。
　　2、检测AML诱导治疗前后eIF4E表达情况，观察诱导治疗前后eIF4E表达差异。
　　3、计算M4、M5型AML与其他亚型AML eIF4E表达情况，进一步比较不同亚型AML之间eIF4E表达的差异。
　　4、统计AML基因突变的表达情况，分析eIF4E表达与AML其他分子生物学异常的相互关系。
　　方法:
　　1、标本采集:采集初诊AML、诱导治疗达完全缓解AML及非肿瘤对照者骨髓标本，提取单个核细胞，加入TRIzol试剂充分裂解细胞，-80℃冷冻保存。AML诊断及疗效标准符合张之南《血液病诊断及疗效标准》。非肿瘤对照者纳入疾病包括免疫性血小板减少症、良性疾病导致的缺铁性贫血。
　　2、实验分组:将初诊AML设为实验组，非肿瘤对照者设为对照组。将实验组能够耐受并同意化疗者进行常规诱导化疗，其中，非M3型AML化疗方案为DA(柔红霉素45-60mg/m2/d×3d、阿糖胞苷100-150mg/m2/d×7d)或IDA（去甲氧柔红霉素8-12mg/m2/d×3d、阿糖胞苷100-150mg/m2/d×7d）标准诱导方案;M3型AML化疗方案为维甲酸+三氧化二砷（维甲酸20mg/m2/d口服至完全缓解、三氧化二砷0.16mg/kg/d静脉注射至完全缓解）双诱导方案，并根据个体情况加用蒽环类药物化疗。
　　3、检测方法:根据人eIF4E基因mRNA序列设计引物(NM_001130679)，eIF4E上游引物:5'-ACGGAATCTA ATCAGGAGGT-3'，下游引物:5'-TTCCCACATAGG CTCAATAC-3'，扩增片段长度为246bp。根据人β-actin基因mRNA序列设计引物(BC_002409)，β-actin上游引物:5'-CTGGGACGACATGGAGAAA A-3'，下游引物:5'-AAGGAAGGCTGGAAGAGTGC-3'，扩增片段长度为564bp。使用淋巴细胞分离液提取单个核细胞，使用TRIzol试剂等抽提RNA，并用AMV逆转录试剂盒进行逆转录，在聚合酶链式反应体系中分别加入β-actin、eIF4E引物进行聚合酶链式反应，使用琼脂糖凝胶电泳鉴定β-actin、eIF4E的表达。
　　4、统计分析:根据所得实验数据进行统计分析，定量资料两组间比较采用t检验，定性资料两组间比较采用卡方检验，定性资料关联性分析采用卡方检验。
　　结果:
　　1、本实验通过RT-PCR法检测AML骨髓标本eIF4E表达情况，测得55例初诊AML中36例eIF4E阳性表达，eIF4E阳性率为65.5％，经诱导治疗达完全缓解后3例AML骨髓细胞eIF4E由阳性转为阴性，非肿瘤对照者eIF4E全部阴性。
　　2、18例M4、M5型AML中15例eIF4E阳性表达，eIF4E阳性率为83.3％，37例其他亚型AML中21例eIF4E阳性表达，eIF4E阳性率为56.8％，统计学分析提示M4、M5型AML与其他亚型AMLeIF4E表达无差异(P＞0.05)。
　　3、55例初诊AML中，4例FLT3/ITD基因突变阳性表达，统计学分析提示eIF4E表达与FLT3/ITD基因突变表达无相关性(P＞0.05)。
　　结论:
　　1、部分初诊AML eIF4E高表达，诱导治疗达完全缓解后少部分AML骨髓细胞eIF4E表达水平下降。eIF4E表达水平有可能作为AML控制情况的一个检测指标。
　　2、M4、M5型AML与其他亚型AML eIF4E表达无差异。
　　3、eIF4E表达与FLT3/ITD等分子指标表达相互独立，无相关性。

目录

摘要

前言

材料与方法

1 主要材料和实验对象

2 实验方法

3 统计学处理

结果

1 电泳图像

2 结果分析

讨论

1 eIF4E表达增高与AML等肿瘤性疾病的关系

2 部分初诊AML eIF4E表达增高，完全缓解后少部分AML骨髓细胞eIF4E表达水平下降，提示eIF4E表达水平有可能作为AML控制情况的一个分子生物学检测指标

3 各亚型AML eIF4E表达的差异

4 eIF4E表达与AML相关的其它分子生物学异常之间的关系

结论

参考文献

英汉缩略词对照表

致谢

eIF4E及eIF4E相关性肿瘤的研究进展 综述

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