bFGF、BMP-2基因转染对羊骨髓间充质干细胞成骨功能影响的体外实验研究

摘要

目的：分析bFGF和BMP-2基因单独和联合转染对体外培养的羊BMSCs的增殖和骨向分化的影响，比较Collagen-Ⅰ、OC、OPN等成骨相关基因于转染前后相对表达量的差别，为构建组织工程骨的种子细胞做理论依据。
　　方法：全骨髓培养法培养羊BMSCs，构建bFGF、BMP-2慢病毒载体，分别转染羊BMSCs，流式细胞仪检测转染率，将得到bFGF组、BMP-2组、联合组，对照组细胞，提取RNA后使用实时定量PCR和Western-blot检测Collagen-Ⅰ、OC、OPN等成骨相关基因的mRNA水平和蛋白水平相对表达量的变化。
　　结果：（1）慢病毒载体转染的BMSCs的转染率达95.4％，且 bFGF和BMP-2均稳定表达。（2）mRNA水平上，在 Collagen-Ⅰ和OC基因，bFGF主效应、BMP-2主效应、交互效应均有统计学意义（P﹤0.05）。bFGF和BMP-2均能促进BMSCs的两基因高表达，且bFGF与BMP-2间存在协同作用。联合基因转染时Collagen-Ⅰ和OC基因表达高于单一基因转染。但在OPN基因，bFGF主效应无统计学意义（P﹥0.05）。多元析因显示，bFGF和BMP-2两因子均能增高成骨相关基因 mRNA表达且存在协同的交互作用（P﹤0.05）。（3）蛋白水平上，在Collagen-Ⅰ、OC和OPN蛋白，bFGF主效应、BMP-2主效应、交互效应均有统计学意义（P﹤0.05）。bFGF和BMP-2均能促进BMSCs的三个成骨相关基因蛋白高表达，且bFGF与BMP-2间分别存在协同作用。联合基因转染时Collagen-Ⅰ和OC蛋白表达高于单一基因转染。多元析因显示，bFGF和BMP-2两因子均能增高成骨相关蛋白表达且存在协同的交互作用（P﹤0.05）。
　　结论：体外实验显示bFGF和BMP-2在成骨相关基因的表达上具有协同的交互作用，且联合转染组中的Collagen-Ⅰ、OC、OPN等成骨相关基因mRNA水平和蛋白水平相对表达量均最高，该组细胞的成骨功能最强，适合作为组织工程骨的种子细胞。

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前言

研究内容与方法

1研究材料及仪器

2 内容与方法

3 质量控制

4 统计方法

5技术路线图

结果

1 羊的骨髓间充质干细胞的培养

2 慢病毒载体的构建及相关检测

3 慢病毒感染羊骨髓间充质干细胞

4 成骨相关基因的检测

5 统计学检测

讨论

1羊的骨髓间充质干细胞的培养

2 慢病毒的构建及转染

3 成骨功能的检测

4 结语与不足

小结

致谢

参考文献

综述

攻读硕士学位期间发表的学术论文

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