SPIO标记大鼠骨髓间充质干细胞：生物学活性及体外MRI成像效应评价

摘要

目的：
　　进一步研究不同浓度SPIO标记大鼠骨髓间充质干细胞对其生物学活性及分化能力及体外MRI成像效应的影响，为SPIO成功应用临床提供实验基础。
　　方法：
　　采用全骨髓贴壁筛选法，分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)，待细胞传至第4代时，用0.75μg/ml多聚赖氨酸(PLL)包裹25μg/ml,50μg/ml,100μg/mlSPIO，并用PLL-SPIO孵育细胞24h、48h、72h。孵育结束后进行普鲁士染色、铁含量测定、透射电镜等实验，来检测细胞SPIO标记率；采用3.0TMRI(T1WI、T2WI、T2*WI)扫描25μg/ml,50μg/ml,100μg/mlSPIO标记细胞，并运用MRI自动测量系统，测量每种扫描序列图像信号强度，来检测不同浓度SPIO标记细胞具体成像的差异；细胞周期、凋亡等实验，来检测SPIO对细胞活性的影响；细胞分化诱导实验（成脂、成骨、成软骨、成内皮）来检测SPIO对细胞分化能力的影响。
　　结果：
　　普鲁士染色:25μg/ml组标记率(％)分别为70.1±9.4、75.5±8.6、76.3±7.9，与50μg/ml组、100μg/ml组相比不具有有统计学差异(P>0.05)。铁含量测定:25μg/ml组细胞含铁量(pg/cell)为14.4±1.05、14.9±0.7、16.9±0.08，与50μg/ml组、100μg/ml组相比不具有有统计学差异(P>0.05)。透射电镜标记:胞质内可见许多囊泡样包涵体，囊泡内有浓聚细小的铁颗粒。MRI扫描:T1WI、T2WI和T2*WI序列信号均呈低信号。其中，扫描106细胞，25μg/ml组、25μg/ml组、25μg/ml组信号平均降低(65.6±7.9)%、(70.2±0.8)%、(72.7±10.3)%，25μg/ml组与50μg/ml组、100μg/ml组不具有统计学差异（P>0.05）。100μg/ml组rMSCs增殖指数(%)分别为19.9±1.4、10.1±0.3、9.5±0.2，与未标记细胞间有统计学差异(P<0.05)。对照组、25μg/ml组、50μg/ml组和100μg/ml组细胞vWF图像灰度值分别为54.7±5.5、53.9±7.9、51.1±3.4、35.6±8.7。其中，仅100μg/ml组与未标记细胞间有统计学差异(P<0.05)。
　　结论：
　　0.75μg/ml多聚赖氨酸(PLL)包裹(25μg/ml)SPIO，孵育rMSCs24h即可有效标记rMSCs。其中，100μg/ml SPIO孵育rMSCs24h即可明显影响细胞生物学活性和分化能力。临床MRI(T1WI、T2WI、T2*WI)扫描SPIO标记细胞，信号改变明显，图像清晰。其中，T2*WI序列最敏感，25μg/ml组就可以引起明显的信号改变。

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中文摘要

英文摘要

前言

研究内容与方法

第一部分 大鼠骨髓间充质干细胞分离、培养及鉴定

引言

材料与方法

结果

讨论

第二部分 不同浓度SPIO标记rMSCs及体外MRI成像

引言

材料与方法

结果

讨论

第三部分 不同浓度SPIO标记rMSCs对其增殖、粘附能力的影响

引言

材料与方法

结果

讨论

第四部分 不同浓度SPIO标记rMSCs对其分化能力的影响

引言

材料与方法

结果

讨论

全文总结

致谢

参考文献

综述

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