砷对皮肤细胞凋亡及角化相关基因表达的影响与早期皮肤损伤研究

摘要

目的:探讨砷对皮肤细胞凋亡及相关角化基因表达情况的影响，为进一步阐述砷致皮肤早期损伤的研究提供依据。
　　方法:
　　1、采用MTT还原法检测细胞生长情况;确定LC50及染毒浓度，染毒浓度分别为LC50的1/50、1/20、1/10。
　　2、流式细胞仪检测HaCaT细胞的凋亡情况。
　　3、将30只健康成年清洁级雄性家兔随机分为5组，每组6只，分别为对照组（去离子水）及亚砷酸钠染毒组。采用自由饮水方式进行染毒，连续染毒12周。染毒剂量分别为LD50的1/100、1/50、1/20、1/10。
　　4、染毒12周结束后，取家兔同一部位的皮肤进行病理学检查。
　　5、通过实时荧光定量(Real-TimeQuantitative PCR)检测HaCaT细胞中和家兔皮肤组织中Nrf2、K1和K10mRNA的表达水平。
　　结果:
　　1、亚砷酸钠染毒HaCaT细胞24h的LC50为65.00μmol/L，染毒浓度即LC50的1/50为1.30μmol/L，LC50的1/20为3.25μmol/L，LC50的1/10为6.50μmol/L，对照组为0μmol/L。
　　2、1.30μmol/L亚砷酸钠染毒48h能显著促进HaCaT细胞增殖;3.25μmol/L亚砷酸钠染毒96h、6.25μmol/L亚砷酸钠染毒72h显著抑制HaCaT细胞增殖，且差异有统计学意义(P＜0.05）。
　　3、1.30μmol/L亚砷酸钠能抑制HaCaT细胞凋亡，24h时凋亡率最低且差异有统计学意义(P＜0.05);3.25μmol/L、6.25μmol/L亚砷酸钠染毒48h、72h可使HaCaT细胞凋亡率逐渐升高且差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　4、1.30μmol/L亚砷酸钠染毒HaCaT细胞24h能促进Nrf2mRNA、K1mRNA和K10mRNA的表达上调，6.25μmol/L的亚砷酸钠染毒72h可使HaCaT细胞中Nrf2mRNA、K1mRNA、K10 mRNA表达显著下调且差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　5、亚砷酸钠染毒家兔的LD50为13mg/kg，染毒剂量即LD50的1/100为0.13mg/kg、LD50的1/50为0.26mg/kg、LD50的1/20为0.65mg/kg、LD50的1/10为1.30mg/kg，对照组0 mg/kg。
　　6、与对照组相比，染毒组家兔体重基本呈现增加趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　7、电镜结果显示染毒组家兔皮肤角质层有不同程度的改变，1.30mg/kg亚砷酸钠染毒家兔皮肤出现角化层。8、0.13mg/kg、0.26mg/kg亚砷酸钠染毒家兔能使皮肤组织中Nrf2、K1和K10mRNA的表达上调;0.65mg/kg、1.30mg/kg能使皮肤组织中Nrf2mRNA、K1mRNA和K10mRNA的表达下调，其中0.13mg/kg、1.30mg/kg染毒组与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05）。
　　结论:
　　1、亚砷酸钠对HaCaT细胞具有双向调节作用，1.30μmol/L亚砷酸钠能促进细胞增殖、抑制细胞的凋亡，6.50μmol/L亚砷酸钠染毒72h能抑制细胞增殖、促进细胞的凋亡。
　　2、亚砷酸钠染毒能使HaCaT细胞中Nrf2、K1、K10 mRNA表达发生改变，1.30μmol/L亚砷酸钠染毒能使基因表达上调，随着染毒时间延长、染毒浓度增加能使基因表达逐渐下调。
　　3、亚砷酸钠对HaCaT细胞的毒性作用受时间和浓度交互作用的影响，可推测砷暴露随着染毒时间的延长，染毒浓度的加大对皮肤细胞的损害越严重。
　　4、长期水砷暴露会引起皮肤的损伤，造成皮肤病理学的改变，1.30mg/kg亚砷酸钠染毒3个月会促使家兔皮肤角化。
　　5、长期水砷暴露会引起皮肤组织中Nrf2、K1和K10mRNA的改变，0.13 mg/kg能使基因表达上调，1.30mg/kg能使基因表达下调。

目录

声明

中英文缩略词对照表

摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

3 统计分析

4 质量控制

结果

讨论

小结

致谢

参考文献

综述 砷性皮肤角化生物标志物研究进展

攻读硕士学位期间发表的学位论文

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